论文摘要
由细粒棘球蚴引起的细粒棘球蚴病（囊型包虫病）是一种人兽共患病,广泛流行于我国西部,导致严重公共卫生问题,不仅严重危害人民健康,而且造成重大经济损失,严重阻碍西部社会、经济发展。当前诊断囊型包虫病依赖的诊断方法——影像学方法不能进行早期诊断,从而影响药物治疗效果,而免疫学检测敏感特异,可用于早期诊断。目前检测囊型包虫病主要依赖检测患者血清中特异抗体,因此,检测效能极大依赖于所应用的抗原,而目前所应用的抗原或敏感度或特异度存在局限,因此,筛选更有诊断价值的新抗原就成为改善囊型包虫病免疫诊断效能的关键。本研究以采集于新疆额敏县细粒棘球蚴感染绵羊肝包囊的原头节为材料,抽提纯化mRNA构建细粒棘球蚴cDNA表达文库,用确诊的囊型包虫病患者混合血清免疫筛选cDNA表达文库,将其中筛选到的5个强阳性克隆L1、H3、H4、E1-1和K1亚克隆到pGEX-3X或pGEX-4T表达载体进行诱导表达,对表达的重组蛋白对囊型包虫病患者血清和其他寄生虫病患者血清及健康人血清的反应性进行了评价,并对筛选到的基因进行了同源蛋白搜索,对其预测编码蛋白进行了结构和功能分析。结果显示所构建的cDNA文库滴度为1.8×105pfu/ml,文库插入片段长度范围在1.0kb-4.0kb间,平均插入片段长度为2.64kb,插入效率为93.75%。进行亚克隆的5个基因预测编码蛋白均有较好的亲水性、表面可及性、可塑性及众多B细胞表位。同源性搜索显示L1、H3、H4、E1-1和K1编码蛋白分别与细粒棘球绦虫谷胱甘肽转移酶、曼氏血吸虫未命名蛋白、细粒棘球绦虫钙网织蛋白、细粒棘球绦虫苹果酸酶和三角涡虫热休克蛋白90有100%、28%、100%、99%和77%的相似性。其中H3和K1是新筛选到的细粒棘球蚴基因。以ELISA法评价这些基因表达的重组蛋白检测囊型包虫病的敏感度分别为64.20%、88.89%、54.32%、41.98%和53.09%,其中H3表达的重组蛋白检测的阳性率则最高（88.89%）,高于重组AgB8/2检测的敏感度（83.95%）,而L1、H3、H4、E1-1和K1检测的特异度分别为79.34%、76.09%、88.43%、89.26%和89.26%,它们之间没有统计学差异。本研究筛选到2个细粒棘球蚴新基因,其中H3表达重组蛋白检测囊型包虫病患者血清的敏感度高于目前认为最好的抗原AgB8/2,而两者检测的特异度相当。H3基因长度约4kb,且存在58个抗原表位,具有进行进一步改造提高检测敏感度和特异度的空间,因此,有希望成为最有诊断价值的囊型包虫病候选抗原。本研究还建立了细粒棘球蚴cDNA表达文库,为今后进一步筛选具诊断价值的候选抗原奠定了基础。