萘乙酸对睾丸细胞增殖与凋亡的影响研究

论文摘要

目的本研究采用体外细胞培养和喂饲小鼠染毒饲料的方法,观察了萘乙酸（α-naphthlcetic acid, NAA）对小鼠体重、血清GSH-Px水平、MDA含量、睾丸细胞增殖、PCNA、Bcl-2、Caspase-3表达的影响,初步探讨了NAA对小鼠睾丸细胞增殖与凋亡的影响。方法1体外睾丸细胞增殖活性水平：取正常小鼠睾丸组织制成细胞悬液,分别加入不同浓度的NAA与睾丸细胞共同培养,测定（1） 25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L NAA对睾丸细胞增殖活性的影响；（2）50μmol/L和100μmol/L NAA在3、6、12、24、48h对睾丸细胞增殖活性的影响。用MTT法测定睾丸细胞增殖活性水平。2动物实验：将25只健康雄性昆明种小鼠随机分为5组,每组5只。正常对照组和阳性对照组小鼠喂饲普通颗粒饲料,高、中、低剂量组分别将5000、1000、200mg/kg的萘乙酸加入饲料中喂饲小鼠,阳性对照组于处死前3天每天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg体重。小鼠喂养4周。（1）增殖水平：用MTT法测定各组睾丸细胞增殖活性水平,用免疫组织化学方法检测各组增殖细胞核抗原（PCNA）表达（2）凋亡水平：用免疫组织化学方法检测Bcl-2和半光天冬酶（Caspase-3）表达。（3）脂质过氧化指标：摘眼球取血,分离血清,购买相应的测试盒测定血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平和丙二醛（MDA）含量。（4）体重：在饲养过程中,每三天测定小鼠体重一次,并绘制生长曲线。（5）睾丸／体重指数：小鼠处死后取下睾丸组织称其重量,并计算睾丸／体重指数。结果1、体外睾丸细胞增殖活性水平：细胞增殖活性测定结果显示,睾丸细胞体外培养24h,50μmol/L剂量组和正常对照组睾丸细胞增殖活性分别为0.761±0.006和0.891±0.004,差异有显著性（P<0.01）。在同一作用时间点,随着NAA剂量的增加,50、100、200、400μmol/L NAA组的睾丸细胞增殖活性依次降低。随着作用时间的延长50、100μmol/L NAA组的睾丸细胞增殖活性逐渐降低。结果表明NAA对睾丸细胞的增殖活性有抑制作用。2、动物实验：（1）增殖水平：MTT结果显示,高剂量组和正常对照组的睾丸细胞增殖活性分别为0.501±0.069和0.875±0.082,差别有显著性意义（P<0.05）。高剂量NAA组PCNA阳性表达率为8.9%,正常对照组为34.9%,经检验,差异有显著性（P<0.05）。（2）凋亡水平：高、中剂量NAA组Bcl-2阳性表达率分别为11.4%和24.9%,正常对照组为33.3%,经检验,差异均有显著性（P<0.05）。高剂量组和正常对照组Caspase-3阳性表达率分别为41.3%和9.1%,差别有统计学意义。（3）血清GSH-Px水平和MDA含量：高、中剂量组GSH-Px活力分别为759.01±11.32 NU/ml、908.87±10.96NU/ml,均低于正常对照组,差异有显著性（P<0.05）。MDA含量高剂量组和正常对照组分别为10.41±0.12 nmol/ml、8.41±0.12 nmol／ml,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）体重：给予萘乙酸28天以后,各剂量组小鼠体重与对照组相比均有所降低,高、中剂量组小鼠体重分别为14.96±0.83和31.48±1.19,与对照组相比差异有显著性（P<0.01）。（5）睾丸／体重指数：高剂量组与正常对照组睾丸／体重指数分别为（1.383±0.029）%和（0.859±0.025）%,差别有显著性意义（P<0.05）。中剂量组也较正常对照组升高（P<0.05）。结论1、NAA对睾丸细胞的增殖活性有抑制作用,可降低睾丸细胞PCNA蛋白的表达水平。2、NAA能降低睾丸细胞Bcl-2的表达,提高Caspase-3的表达,诱发睾丸细胞凋亡。3、NAA可增加自由基对细胞的氧化损伤,增加了脂质过氧化水平。4、NAA对小鼠的生长有抑制作用,造成睾丸／体重指数增加。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 方法
• 2.1 体外睾丸细胞增殖活性水平
• 2.2 动物实验
• 2.2.1 实验分组与处理
• 2.2.2 观察指标
• 3 统计分析
• 结果
• 1 体外睾丸细胞增殖活性水平
• 2 动物实验结果
• 2.1 睾丸细胞增殖活性结果
• 2.2 PCNA蛋白的表达结果
• 2.3 Bcl-2的表达结果
• 2.4 Caspase-3表达结果
• 2.5 血清中GSH-Px水平和MDA含量
• 2.6 体重变化结果
• 2.7 睾丸/体重指数
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢