论文摘要
目的:增生性瘢痕（Hyperplastic Scar,HS）是人类皮肤受损后出现的一种病理现象,更是烧伤后康复的一大难题,其发病机制至今尚不十分清楚。有研究显示神经肽P物质（Substance P ,SP）与瘢痕增生瘙痒密切相关,但其作用效应及机制不清,本实验从以下几方面进行研究:1. SP对HS成纤维细胞（fibroblast,FB）增殖、活力和胶原合成的影响和量效关系,对肥大细胞（mast cell,MC）组胺释放的影响和量效关系;2. SP对成纤维细胞增殖与凋亡相关基因的作用情况;3.β-catenin蛋白在HS组织中含量与细胞内定位的情况,以推测其在瘢痕增生中的作用;4. SP是否可以对成纤维细胞的β-catenin表达产生调控作用,探讨SP促进成纤维细胞增殖的发生机制;5.应用SP受体拮抗剂对SP的作用加以干预,研究拮抗剂对SP作用的阻断效果,为研发抗瘢痕增生药物打下基础。方法:收集HS及正常皮肤（normal skin,NS）组织,组织块分离培养成纤维细胞,分别进行实验。1.应用免疫组化方法观察SP神经纤维在HS和NS组织中的形态,以及SP在HS和NS分离培养的成纤维细胞中的表达;通过细胞计数、MTT法测定细胞增殖和活力、3H-脯氨酸摄入测定SP对其胶原代谢的影响;观察HS成纤维细胞经过SP作用后电镜的形态学改变。2.应用不同时间和剂量的SP及不同浓度的Ca2+作用于人HS中肥大细胞,用免疫荧光法测定组胺的释放率,免疫组化及甲苯胺蓝研究HS中SP神经纤维和肥大细胞的改变和形态关联,光镜及电镜研究HS中肥大细胞形态和超微结构的改变。3.免疫组化染色检测HS及NS中增殖细胞核抗原PCNA、c-myc原癌基因、Bcl-2凋亡抑制基因及Bax凋亡促进基因蛋白的表达情况;TUNEL法行细胞凋亡原位检测;分离培养细胞检测SP及其受体拮抗剂对PCNA、c-myc、Bcl-2和Bax蛋白的作用以及细胞的凋亡情况。4.应用免疫组化方法及原位杂交方法检测HS及NS组织中β-catenin蛋白的表达情况及细胞内β-catenin蛋白的定位。5. SP及其受体拮抗剂作用于成纤维细胞后,检测β-catenin基因及蛋白表达情况。结果:1.在HS中,SP神经纤维分布显著高于NS。2. SP可以促进HS成纤维细胞增殖和活力,促进成纤维细胞的胶原合成,可引起
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