银杏叶提取物在大鼠视神经损伤再生中的作用及机制探讨

论文摘要

目的:外伤性视神经损伤导致患者的视力下降甚至失明,逐年增加,目前临床上尚无确切的治疗方法。银杏叶提取物（Ginkgo Biloba extract,EGb761）,具有抗氧化、清除自由基等作用,未发现其毒副作用。现制作大鼠视神经不完全损伤动物模型,球后注射EGb761,观察视网膜及视神经形态学改变及一氧化氮合酶（iNOs）和Bcl-2/Bax的变化并测定生长因子相关蛋白-43（growth associated protein-43,GAP- 43）mRNA的表达。从而观察局部应用EGb761对外伤性视神经损伤的作用,为EGb761治疗视神经损伤提供实验依据及理论基础。方法健康雌性SD大鼠60只,体重250±10g,行外眼及眼底检查无病变者纳入实验。按随机对照表分组,正常对照组（正常组）12只大鼠,双眼用于实验研究;视神经损伤对照组（对照组）和EGb761治疗组（治疗组）各24只大鼠,右眼为损伤眼,用于实验研究（左眼不做处理）。按伤后处死时间3天、7天、14天及28天各分为4个时间点,每个时间点6只大鼠眼。对照组和治疗组共48只大鼠均制作视神经不完全损伤模型。对照组24只大鼠从术后1小时开始给予生理盐水0.05ml右眼球后注射,隔日一次应用。治疗组24只大鼠给予EGb761（生理盐水配制）0.05ml （100mg/kg）右眼球后注射。具体操作及时间均同对照组。正常组不做任何处理。于术后相应时间点取各组动物视神经及视网膜组织用于实验研究。采用HE染色观察各组视网膜及视神经组织形态学变化、免疫组织化学测定各组视神经iNOs、Bcl-2、Bax阳性细胞和Bcl-2/Bax的变化及RT-PCR（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）测定视神经GAP- 43mRNA的表达。本实验数据平均值用x±s表示,采用两样本t检验,SPSS 14.0软件包进行统计学分析。结果1 HE染色正常组视网膜神经节细胞层、内核层及感光细胞层各层结构清晰可见。对照组各时间点视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）,排列紊乱,可见空泡化的RGCs,内核层和感光细胞不同程度的减少。治疗组也可见上述改变,但治疗组各时间点均较对照组各时间点损伤情况轻。2 HE染色正常组视神经结构整齐,胶质细胞排列整齐与纤维走向一致。对照组视神经结构紊乱,神经纤维排列紊乱,胶质细胞核增多,部分细胞空泡变性、核溶解。治疗组也可见上述改变,但治疗组各时间点均较对照组各时间点损伤情况轻。3在实验的3天、7天、14天及28天,对照组和治疗组视神经组织iNOs阳性细胞表达较正常组显著升高（P<0.01）;治疗组较对照组iNOs阳性细胞表达显著降低（P<0.01）;差别均有统计学意义。4在实验的3天、7天对照组视神经组织Bcl-2阳性细胞表达较正常组显著升高（P<0.05）,14天及28天对照组较正常组显著降低（P<0.05）;3天、7天、14天及28天治疗组较正常组显著升高（P<0.05）;3天、7天、14天及28天治疗组较对照组显著升高（P<0.01）,差异均有统计学意义。5 3天、7天对照组视神经组织Bax阳性细胞较正常组表达水平高（P<0.01）,14天、28天对照组较正常组无明显变化（P>0.05）;3天、7天治疗组较正常组显著升高（P<0.05）,14天、28天治疗组较正常组无明显变化（P>0.05）; 3天、7天治疗组较对照组显著降低（P<0.01）,14、28天治疗组较对照组无明显变化（P>0.05）。6视神经组织Bcl-2/Bax比值在3天、7天、14天及28天四个时间点正常组分别为1.117、1.115、1.119、1.115;对照组分别为1.123、1.016、1.032、1.017;治疗组分别为1.679、1.881、1.831、1.367。治疗组Bcl-2/Bax比值3天、7天、14天时一直处于较高水平,28天时开始降低,但仍较对照组比值高。7正常组视神经组织未见GAP-43mRNA特异扩增条带。对照组和治疗组均可见GAP-43mRNA特异扩增条带。3天、7天、14天及28天治疗组GAP-43mRNA和对照组比较显著升高,P<0.01,差异均有统计学意义。结论1外伤性视神经损伤后RGCs排列紊乱,细胞数量减少;视神经结构紊乱,神经纤维排列紊乱。2 EGb761能减轻外伤性视神经损伤后RGCs和视神经的损害;降低视神经组织iNOs、Bax蛋白的表达;增加Bcl-2蛋白和GAP-43的表达;提高Bcl-2/Bax的比率。3 EGb761对外伤性视神经损伤有一定的促再生及修复作用,抑制RGCs细胞凋亡是其作用机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 视神经损伤后促再生因素的研究进展
• 致谢
• 个人简历