本文主要研究内容
作者王婷芬（2019）在《黍糠过氧化物酶的磷酸酶活性研究》一文中研究指出：过氧化物酶（Peroxidase,POD）是一类广泛存在于细菌,真菌,植物和动物中的氧化还原酶,可利用过氧化氢来介导多种无机和有机底物的氧化。大多POD是单一多肽链与含Fe（Ⅲ）-原卟啉IX辅基构成的血红素蛋白,多肽链分子须与血红素结合才构成全酶,血红素辅基是POD电子传递的载体。III类POD是来源于植物的分泌型过氧化物酶,在胞质中合成后可以转运至细胞壁或液泡,参与多种生理功能,如机体内毒性过氧化物的清除,细胞壁的合成,伤口愈合,生长素合成及代谢等。已报道含血红素辅基的蛋白（肌红蛋白,细胞色素c等）可以在H2O2存在的条件下对DNA进行氧化断裂。PmPOD是来源于黍子中的一种含血红素辅基的阳离子过氧化物酶,可以诱导结直肠癌细胞发生坏死性凋亡（Necroptosis）,PmPOD诱导的坏死性凋亡与PmPOD造成DNA的断裂有关。因此本论文将着重研究PmPOD对DNA的断裂及其机制。本研究首先利用琼脂糖凝胶电泳技术,以pBR322,pUC18和pGEM-T为底物,并结合DTT,NaN3,以及二价金属离子等试剂初步研究PmPOD是否可以断裂DNA;通过连接和转化实验以及光谱扫描的方法探究PmPOD切割DNA的分子机制,即证实PmPOD诱导DNA断裂是水解断裂,还是氧化断裂,并进一步以dNMPs等为底物,通过HPLC分析PmPOD对dNMPs的水解作用;在上述研究基础上,分别测定了PmPOD过氧化物酶和磷酸酶活性的最适pH值;最后通过X射线晶体学方法解析得到了PmPOD的三维结构;结合PmPOD的氨基酸序列,分析了PmPOD发挥磷酸酶活性的活性位点。实验结果表明,在一定时间及浓度范围内,PmPOD通过类似于天然核酸内切酶的切割机制将超螺旋环状DNA切割成缺刻型和线状DNA,而在高浓度PmPOD及长时间作用时,可以将质粒DNA完全降解。连接转化实验表明,PmPOD以水解的方式断裂质粒DNA,抑制和光谱扫描实验表明,活性氧（ROS）和铁卟啉IX辅基均不参与PmPOD介导的DNA切割,说明PmPOD与其它报道的血红素蛋白（肌红蛋白等）不同,其通过水解而不是氧化断裂机制切割DNA。二价金属离子实验表明,与其它内切核酸酶类似,Mg2+显著增强PmPOD的DNA切割活性。进一步的研究表明,PmPOD可以水解脱去dNMPs的磷酸根,表明PmPOD具有磷酸酶活性。随后将PmPOD与辣根过氧化物酶（HRP）进行比较,结果发现,PmPOD的磷酸酶活性远高于HRP,但过氧化物酶活性低于HRP。本研究通过X射线晶体衍射技术获得了PmPOD的三维结构,通过对PmPOD和其它粮食作物来源POD的氨基酸序列比较分析发现,PmPOD序列中包含一段HCXXXXXR保守序列,该序列与已报道的双特异性磷酸酶（DUSPs）的活性位点相似。该研究为该类过氧化物酶切割DNA的机制提供了有力支撑,并为进一步研究其在酶学方面的研究提供了参考价值。
Abstract
guo yang hua wu mei （Peroxidase,POD）shi yi lei an fan cun zai yu xi jun ,zhen jun ,zhi wu he dong wu zhong de yang hua hai yuan mei ,ke li yong guo yang hua qing lai jie dao duo chong mo ji he you ji de wu de yang hua 。da duo PODshi chan yi duo tai lian yu han Fe（Ⅲ）-yuan bu lin IXfu ji gou cheng de xie gong su dan bai ,duo tai lian fen zi xu yu xie gong su jie ge cai gou cheng quan mei ,xie gong su fu ji shi PODdian zi chuan di de zai ti 。IIIlei PODshi lai yuan yu zhi wu de fen bi xing guo yang hua wu mei ,zai bao zhi zhong ge cheng hou ke yi zhuai yun zhi xi bao bi huo ye pao ,can yu duo chong sheng li gong neng ,ru ji ti nei du xing guo yang hua wu de qing chu ,xi bao bi de ge cheng ,shang kou yu ge ,sheng chang su ge cheng ji dai xie deng 。yi bao dao han xie gong su fu ji de dan bai （ji gong dan bai ,xi bao se su cdeng ）ke yi zai H2O2cun zai de tiao jian xia dui DNAjin hang yang hua duan lie 。PmPODshi lai yuan yu shu zi zhong de yi chong han xie gong su fu ji de yang li zi guo yang hua wu mei ,ke yi you dao jie zhi chang ai xi bao fa sheng huai si xing diao wang （Necroptosis）,PmPODyou dao de huai si xing diao wang yu PmPODzao cheng DNAde duan lie you guan 。yin ci ben lun wen jiang zhao chong yan jiu PmPODdui DNAde duan lie ji ji ji zhi 。ben yan jiu shou xian li yong qiong zhi tang ning jiao dian yong ji shu ,yi pBR322,pUC18he pGEM-Twei de wu ,bing jie ge DTT,NaN3,yi ji er jia jin shu li zi deng shi ji chu bu yan jiu PmPODshi fou ke yi duan lie DNA;tong guo lian jie he zhuai hua shi yan yi ji guang pu sao miao de fang fa tan jiu PmPODqie ge DNAde fen zi ji zhi ,ji zheng shi PmPODyou dao DNAduan lie shi shui jie duan lie ,hai shi yang hua duan lie ,bing jin yi bu yi dNMPsdeng wei de wu ,tong guo HPLCfen xi PmPODdui dNMPsde shui jie zuo yong ;zai shang shu yan jiu ji chu shang ,fen bie ce ding le PmPODguo yang hua wu mei he lin suan mei huo xing de zui kuo pHzhi ;zui hou tong guo Xshe xian jing ti xue fang fa jie xi de dao le PmPODde san wei jie gou ;jie ge PmPODde an ji suan xu lie ,fen xi le PmPODfa hui lin suan mei huo xing de huo xing wei dian 。shi yan jie guo biao ming ,zai yi ding shi jian ji nong du fan wei nei ,PmPODtong guo lei shi yu tian ran he suan nei qie mei de qie ge ji zhi jiang chao luo xuan huan zhuang DNAqie ge cheng que ke xing he xian zhuang DNA,er zai gao nong du PmPODji chang shi jian zuo yong shi ,ke yi jiang zhi li DNAwan quan jiang jie 。lian jie zhuai hua shi yan biao ming ,PmPODyi shui jie de fang shi duan lie zhi li DNA,yi zhi he guang pu sao miao shi yan biao ming ,huo xing yang （ROS）he tie bu lin IXfu ji jun bu can yu PmPODjie dao de DNAqie ge ,shui ming PmPODyu ji ta bao dao de xie gong su dan bai （ji gong dan bai deng ）bu tong ,ji tong guo shui jie er bu shi yang hua duan lie ji zhi qie ge DNA。er jia jin shu li zi shi yan biao ming ,yu ji ta nei qie he suan mei lei shi ,Mg2+xian zhe zeng jiang PmPODde DNAqie ge huo xing 。jin yi bu de yan jiu biao ming ,PmPODke yi shui jie tuo qu dNMPsde lin suan gen ,biao ming PmPODju you lin suan mei huo xing 。sui hou jiang PmPODyu la gen guo yang hua wu mei （HRP）jin hang bi jiao ,jie guo fa xian ,PmPODde lin suan mei huo xing yuan gao yu HRP,dan guo yang hua wu mei huo xing di yu HRP。ben yan jiu tong guo Xshe xian jing ti yan she ji shu huo de le PmPODde san wei jie gou ,tong guo dui PmPODhe ji ta liang shi zuo wu lai yuan PODde an ji suan xu lie bi jiao fen xi fa xian ,PmPODxu lie zhong bao han yi duan HCXXXXXRbao shou xu lie ,gai xu lie yu yi bao dao de shuang te yi xing lin suan mei （DUSPs）de huo xing wei dian xiang shi 。gai yan jiu wei gai lei guo yang hua wu mei qie ge DNAde ji zhi di gong le you li zhi cheng ,bing wei jin yi bu yan jiu ji zai mei xue fang mian de yan jiu di gong le can kao jia zhi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山西大学的王婷芬，发表于刊物山西大学2019-11-12论文，是一篇关于阳离子过氧化物酶论文,切割论文,水解断裂论文,过氧化物酶活性论文,磷酸酶活性论文,山西大学2019-11-12论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山西大学2019-11-12论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：阳离子过氧化物酶论文; 切割论文; 水解断裂论文; 过氧化物酶活性论文; 磷酸酶活性论文; 山西大学2019-11-12论文;