李离体繁殖及再生体系的建立

论文摘要

本文以中国李品种大石早生李（Prunus salicina Lindl.’Oshiwase’）、小黄李（Prunussalicina Lindl.’Xiaohuangli’）和欧洲李品种大玫瑰（Prunus domestica L.’Grand Rose’）为试材,建立了稳定高效的李离体快繁技术体系,并在此基础上,研究了不同因子对小黄李再生不定芽的影响,以期建立高效的李再生技术体系,为李遗传转化研究和创新种质资源奠定基础。主要结果如下:1.以中国李品种大石早生李为试材,通过外植体消毒试验,结果表明4-5月为最佳取材时期,此时外植体正处于春季萌发生长阶段,带菌较少,成活率高,易诱导成苗。此时期外植体采用70%酒精30s+（O.5%NaClO+吐温-20 2-3滴）12min消毒效果较好。其较适合的继代增殖培养基配方为:F14+0.6-0.8 mg·L-16-BA+0.1-0.2mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,增殖倍数达6.0;较适合生根的培养基为:1/2Ms+0.2 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1IBA,生根率66.7%;驯化基质:蛭石:珍珠岩:泥炭（1:1:1）,成活率皆在65%以上。2.以小黄李的单芽茎段为外植体进行离体培养,研究不同培养基,植物生长调节剂的种类及其浓度、pH值对小黄李增殖与生根的影响。结果表明:较合适的增殖培养基为F14+0.8 mg·L-1 6-BA+0.2 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,pH值5.4-5.8之间;较合适的生根培养基为1/2MS+0.1 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,生根率达100%,单株平均根数3-4根,且植株生长健壮;以蛭石:珍珠岩:泥炭（1:1:1）移栽生根苗,成活率80%以上,为工厂化育苗生产奠定了基础。3.以欧洲李品种大玫瑰为试材,筛选出其较适合的继代增殖培养基配方:1/2MS+0.5 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1GA3+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,增殖倍数达6.5;较适合生根的培养基:1/2MS+0.2 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1IBA,生根率达79.8%。4.以中国李品种小黄李为试材,研究不同基本培养基种类,植物生长调节剂的种类及浓度、暗处理时间对其不定芽再生率的影响。试验结果表明:叶片、普通茎段、白化茎段三种外植体的最适合再生的基本培养基均为WPM培养基,最佳浓度配比为WPM+1.5 mg·L-16-BA+0.8 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖+6.0 g·L-1琼脂;6-BA的诱导叶片再生效果优于TDZ,其再生的最佳暗处理时间为21d。5.三种外植体中,叶片再生率最高,达66.35%,但再生芽苗不能存活,主要表现为褐化致死,且不同抗氧化剂处理改善褐化现象不明显;其次为白化茎段,普通茎段最差,最高再生频率分别为30.42%、18.57%。但以白化茎段为外植体的再生芽苗生长正常,存活率100%;着生于白化茎段顶端第1、2节位的节间为适宜再生的外植体。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 引言
• 第一章 核果类果树组织培养及遗传转化研究进展
• 1 核果类果树组织培养研究进展
• 1.1 茎尖及茎段培养
• 1.2 胚培养
• 1.3 胚乳、子叶及下胚轴培养
• 1.4 原生质体培养
• 1.5 叶片再生培养
• 1.6 其他类型的培养
• 1.7 组织培养的主要影响因子
• 1.7.1 基本培养基
• 1.7.2 植物生长调节物质
• 1.7.3 培养条件
• 1.8 存在的问题
• 2 核果类果树遗传转化研究进展
• 2.1 核果类果树遗传转化方法
• 2.2 影响果树遗传转化的因素
• 3 小结
• 参考文献
• 第二章 三个李品种离体繁殖体系的建立
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 初代培养
• 1.2.1.1 外植体采集与处理
• 1.2.1.2 外植体表面消毒
• 1.2.2 增殖培养
• 1.2.2.1 基本培养基的筛选
• 1.3.2.2 不同生长调节剂对芽增殖的影响
• 1.2.2.3 培养基pH值对增殖的影响
• 1.2.3 生根培养
• 1.2.4 试管苗驯化移栽
• 1.2.5 培养条件
• 1.2.6 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 大石早生李离体繁殖体系的建立
• 2.1.1 初代培养
• 2.1.1.1 外植体取材时间对培养效果的影响
• 2.1.1.2 不同消毒方法对培养效果的影响
• 2.1.2 增殖培养
• 2.1.2.1 基本培养基为大石早生李增殖的影响
• 2.1.2.2 增殖培养基中BA和NAA对芽增殖的影响
• 2.1.3 不同浓度生长素对生根的影响
• 2.1.4 试管苗炼苗移栽
• 2.2 小黄李砧木离体繁殖体系的建立
• 2.2.1 初代培养
• 2.2.2 基本培养基对小黄李增殖的影响
• 2.2.3 植物生长调节剂对芽增殖的影响
• 2.2.4 培养基pH值对增殖的影响
• 2.2.5 生长素对生根的影响
• 2.2.6 试管苗驯化移栽
• 2.3 大玫瑰离体繁殖体系的建立
• 2.3.1 基本培养基对大玫瑰增殖的影响
• 2.3.2 不同浓度BA和NAA组合对大玫瑰增殖的影响
• 3对大玫瑰芽增殖和伸长的影响'>2.3.3 GA₃对大玫瑰芽增殖和伸长的影响
• 2.3.4 生长素对生根的影响
• 2.3.5 试管炼苗和移栽
• 3 讨论
• 3.1 初代培养的影响因素
• 3.1.1 外植体取材
• 3.1.2 外植体消毒
• 3.2 影响继代培养的因素
• 3.2.1 培养基选择
• 3.2.2 植物生长调节剂的影响
• 3.2.3 培养基pH值的影响
• 参考文献
• 第三章 小黄李离体再生体系的研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 叶片再生
• 1.2.1.1 基本培养基筛选
• 1.2.1.2 植物生长调节剂种类及浓度组合叶片不定芽再生的影响
• 1.2.1.3 暗培养时间对小黄李叶片不定芽再生的影响
• 1.2.1.4 抗氧化剂对叶片再生不定芽的影响
• 1.2.2 茎段再生
• 1.2.2.1 基本培养基筛选
• 1.2.2.2 植物生长调节剂种类及浓度组合茎段不定芽再生的影响
• 1.2.2.3 不同节位对小黄李白化茎段不定芽再生的影响
• 1.2.3 培养条件
• 1.2.4 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 叶片愈伤组织诱导及不定芽再生
• 2.1.1 不同基本培养基对叶片愈伤组织诱导及不定芽再生
• 2.1.2 植物生长调节剂种类及浓度组合叶片不定芽再生的影响
• 2.1.2.1 BA/IBA浓度组合对小黄李不定芽再生的影响
• 2.1.2.2 BA/NAA浓度组合对小黄李不定芽再生的影响
• 2.1.2.3 TDZ/2,4-D浓度组合对小黄李不定芽再生的影响
• 2.1.3 暗培养时间对小黄李叶片不定芽再生的影响
• 2.1.4 小黄李叶片再生不定芽的褐化问题
• 2.2 茎段愈伤组织诱导及不定芽再生
• 2.2.1 不同基本培养基对茎段愈伤组织诱导及不定芽再生
• 2.2.2 植物生长调节剂种类及浓度组合茎段不定芽再生的影响
• 2.2.3 不同节位对小黄李白化茎段不定芽再生的影响
• 3 讨论
• 3.1 再生培养基的筛选
• 3.2 植物生长调节剂对再生的影响
• 3.3 暗培养的影响
• 3.4 外植体类型的影响
• 参考文献
• 全文结论
• 图版Ⅰ
• 图版Ⅱ
• 图版Ⅲ
• 图版Ⅳ
• 硕士在读期间发表的论文
• 致谢