论文摘要
肿瘤基因疫苗是近10年来发展起来的新型疫苗,具有安全、有效、制备容易、保存运输方便等优点,因而受到广泛重视。肝细胞癌相关抗原661（hepatic carcinoma-associated 661, HCA661）是一种癌/睾丸抗原（cancer/testis antigen, CT antigen）,选择性表达于肝细胞癌;除睾丸精原细胞外,在正常组织中不表达。CT抗原具有免疫原性,在肿瘤病人体内诱导自发体液和细胞免疫反应。由于睾丸外层有白膜作为免疫屏障,CT抗原可以直接用于抗原特异性肿瘤疫苗的研究。结核分枝杆菌热休克蛋白70（mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70）分子是CD40配体,作为抗原肽载体和天然佐剂促进抗原进入MHC I和MHC II类分子途径,诱导产生抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic Tlymphocytes,CTL）和抗体。mtHSP70羧基端的多肽结合结构域是CD40的最小有效结合部位,足以发挥该作用,并且能够更好地减少机体产生针对mtHSP70的免疫反应。本实验首次利用PCR技术直接从人类真核细胞基因组钓取HCA661基因,构建了真核基因疫苗pCI-HCA661和pCI-HCA661-mtHSP70C;成功建立了体外表达检测系统pCI-eGFP和pCI-HCA661-eGFP;从原核表达系统pQE-HCA661中成功表达并纯化HCA661蛋白;基因疫苗免疫小鼠后取小鼠脾细胞及血清,通过流式细胞术、免疫组化、western blotting印记和ELISA等方法证实,mtHSP70羧基端能够增强HCA661基因疫苗的抗原特异性免疫效果,并最大程度减少机体产生对mtHSP70的免疫应答。
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