糖肾方颗粒逆转早期糖尿病肾病肾损害的研究

糖肾方颗粒逆转早期糖尿病肾病肾损害的研究

论文摘要

一、研究目的本项目拟在前期研究的基础上,通过对临床期前的糖尿病肾病(DN)患者及链脲佐菌素(STZ)所致DN模型大鼠的观察,进一步探讨DN与中医伤寒论少阴病阳虚证之间的病证关系,并对糖肾方颗粒的治病机理作进一步研究,特别是对尿及肾皮质21-N-乙酰—B—D-氨基葡萄糖苷酶(21—NAG)、大鼠肾脏nephrin蛋白的表达以及肾小球基底膜足细胞变化的影响,以期按照以药测证的方法寻找药物作用的靶点,并尝试以此为基础来阐释DN的发病机理及中医辨证规律,以对21世纪人类健康杀手——DN的有效防治作出贡献。二、研究内容与方法1.临床研究将符合西医早期糖尿病肾病(IDN)诊断标准者96例患者,分为治疗组48例和对照组48例,两组均采取相同的基础治疗,包括糖尿病健康教育、糖尿病饮食、控制血压、血糖。对照组在此基础上加服卡托普利(开搏通)25mg/次,每天2次;治疗组在此基础上加服糖肾方颗粒,每包8克,每次2包,每天2次;治疗组与对照组均以8周为一疗程,服药一个疗程。观察患者中医症状、舌、脉、血压、脉搏、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2hBG)、血清肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(mALB)等各种情况,来分析糖肾方颗粒对IDN肾脏的保护机制。2.实验研究将SPF级雄性SD大鼠采用一次性腹腔注射STZ(剂量为55mg/kg)建立IDN模型。将模型成功的大鼠随机分为DN早期干预组(I):确定成模第二天即予随机分组:分为糖肾方颗粒低剂量治疗组(TNI)、糖肾方颗粒高剂量治疗组(TGI)、开博通对照组(KI)、模型对照组(MD)、正常对照组(ND)。DN晚期干预组(O):成模后二周予随机分组:分为糖肾方颗粒低剂量治疗组(TNO)、糖肾方颗粒高剂量治疗组(TGO)、开博通对照组(KO)、模型对照组(MD)、正常对照组(ND)。各组大鼠灌胃给药,开搏通组用开搏通6.25mg/kg/d灌胃。糖肾方颗粒低剂量组每只予糖肾方颗粒溶液4g/kg/d灌胃;糖肾方颗粒高剂量组每只予糖肾方颗粒溶液8g/kg/d灌胃;模型对照组与正常对照组用生理盐水5ml/kg灌胃。上述各组灌药1次/d,连续给药共8周。各组大鼠按25g/只进食,饮水自由,实验中不予使用胰岛素和其它降糖药。观察各组大鼠一般情况,包括对饮水量、尿量、皮毛状况、精神状态等进行观察,测体重、肾重,计算肾重/体重指数。检测血糖、24h尿蛋白变化情况,紫外分光光度法测大鼠尿、肾皮质NAG的OD值,并计算其酶活性,免疫组化方法检测大鼠肾脏nephrin蛋白的表达,并用电镜观测大鼠的肾脏肾小球基底膜足细胞的变化。三、研究结果1.临床研究观察到在血糖控制的基础上,糖肾方颗粒治疗早期DN的总有效率为58.33%,对照组总有效率为47.92%(P>0.05)。治疗组中医证侯总有效率91.67%明显优于对照组总有效率(54.17%)(P<0.05)。两组均能减轻早期DN患者症状积分、降低早期DN患者FBG、P2hBG、24hUAE及mALB、尿NAG、CRE各项指标:治疗组在改善早期DN患者临床症状、降低FBG、P2hBG、CRE等方面均明显优于对照组(P<0.05)。治疗组在整个观察过程中肝功能无改变,未出现不良反应,证明糖肾方颗粒无毒副作用,有效安全。2、动物实验中观察ND大鼠,精神状态良好,反应灵敏,毛色有光泽,进食正常。MD大鼠及各治疗组大鼠开始表现为多饮、多食、多尿,大便稀塘,精神萎靡,反应迟钝,毛色干枯,光泽较差,拱背蜷卧。随着进展,以上表现逐渐好转,且各治疗组经治疗后,缓解程度较之MD明显。ND的体重升高明显,次与次之间对比均有显著性差异;其余几组在造模后早期都有明显的体重下降过程,但随着干预及病程的进展,体重逐渐上升。统计结果显示模型组及治疗组大鼠第二次体重最低,TNI、KI、TNO、TGO、KO均有显著性降低;第三、四次体重与第二次体重相比均有显著性增加;与第一次体重相比,TNI、TGI、KI、TNO、ND的最后一次体重均有显著性增加;组与组之间相比无显著性差异。治疗前后的血糖降低明显,具有显著性差异,而各组之间相比无显著性差异。右肾重以及肾重体重指数各组相比无显著性差异。尿NAG模型组与其余各组相比显著性增高,肾皮质NAG无显著性差异。各治疗组治疗后24hupro显著下降,与治疗前相比P<0.05,具有显著性差异;治疗后各组24hupro与MD、KO组相比显著下降,P<0.05,具有显著性差异;而其余各治疗组间差异不显著,P>0.05。治疗后KI组的大鼠肾小球nephrin蛋白的表达平均光密度明显低于其余各组,与各组相比P<0.05,具有显著性差异;而TNI、TGO、TNO治疗后各组之间两两相比无明显差异,且与ND组相比也无显著性差异P>0.05,但是与TGI、MD、KO组相比表达明显减少,P<0.05;但TGI、MD、KO组各组大鼠肾小球nephrin蛋白的表达平均光密度两两相比无明显差异P>0.05。透射电镜下可见大鼠肾小球血管袢、基底膜及足突细胞经糖肾方颗粒及开搏通干预治疗后,糖肾方颗粒各组,均得到了不同程度的改善,以TGO改善最为明显,而TGI改善不明显,但无加重趋势;开搏通组基底膜及足突未见明显改善,甚至有加重的表现,尤以KO明显。四、结论1、少阴病阳虚证与DN之间具有紧密的病证相关性2、糖肾方颗粒可以显著改善DN患者的临床症状,提高患者的生活质量。可以延缓或逆转早期DN(或临床期前)的肾损害。3、糖肾方颗粒无毒副作用,临床使用安全。4、实验研究显示糖肾方颗粒组不论早期与晚期应用,均有较好的调整DN异常的肾小球nephrin蛋白的表达的作用,使其更加接近正常对照组的表达,但同时也提示,在早期时不可大剂量应用。5、糖肾方颗粒在改善DN蛋白尿方面具有显著效果,早期干预与开搏通疗效无显著性差异,而晚期干预则糖肾方颗粒的疗效优于开搏通。6、对大鼠尿及肾皮质内的NAG具有调整作用,使其更接近正常,从而具有保护肾小管的作用,由此而起到保护肾功能的作用。7、糖肾方颗粒可以通过改善DN大鼠肾小球基底膜及足细胞的变化而起到逆转与保护DN早期肾损害的作用综上所述,糖肾方颗粒通过对DN大鼠肾小球nephrin蛋白的表达的影响、对大鼠尿及肾皮质内的NAG的调整、蛋白尿的降低、改善DN大鼠肾小球基底膜及足细胞的变化等,具有全面保护肾功能的作用。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 引言
  • 1、临床表现的病理基础
  • 2、预测肾脏损害的临床和实验室指标
  • 3、机理的深入探讨
  • 4、DN的治疗
  • 5、动物模型的研究
  • 6、中医药关于DN的现代研究
  • 第一部分 临床研究
  • 1 研究对象及病例来源
  • 1.1 研究对象
  • 1.2 病例来源
  • 2 诊断标准
  • 2.1 DM诊断标准
  • 2.2 DN分期标准
  • 2.3 DN诊断标准
  • 3 纳入标准及排除标准
  • 3.1 纳入标准
  • 3.2 排除标准
  • 4 研究方法
  • 4.1 分组及基础处理
  • 4.2 给药方法
  • 4.3 观察指标
  • 4.4 疗效评定标准
  • 4.5 安全性评价
  • 4.6 观察、记录、总结的要求
  • 4.7 伦理原则
  • 4.8 统计学处理
  • 5 研究结果
  • 5.1 病例均衡性分析
  • 5.2 临床疗效分析
  • 5.3 安全性检测
  • 第二部分 实验研究
  • 1 实验材料
  • 1.1 实验动物
  • 1.2 饲料
  • 1.3 实验药物以及剂量
  • 1.4 主要仪器
  • 1.5 实验试剂
  • 2 实验方法
  • 2.1 动物饲养
  • 2.2 动物模型制作
  • 2.3 动物分组
  • 2.4 治疗方法
  • 2.5 标本收集及组织处理
  • 2.6 观测指标与方法
  • 2.7 统计方法
  • 3 实验结果
  • 3.1 一般情况
  • 3.2 体重
  • 3.3 各组大鼠肾重(g)、肾/体指数、尿NAG、肾皮质NAG比较
  • 3.4 各组大鼠治疗前后血糖比较
  • 3.5 各组大鼠治疗前后24hupro比较结果
  • 3.6 各组大鼠肾小球nephrin蛋白的表达平均光密度比较结果
  • 3.7 透射电镜结果
  • 第三部分 讨论
  • 1 病因病机的探讨
  • 2 病证相关性探讨
  • 3 辨证组方的分析
  • 4 DN期别的选择
  • 5 糖肾方颗粒临床疗效分析
  • 5.1 总体疗效的改善
  • 5.2 临床症状的改善
  • 5.3 降低血糖
  • 5.4 降低尿mALB,24hpro,尿NAG,保护肾功能
  • 5.5 无毒副作用,使用安全
  • 6 实验部分
  • 6.1 动物模型的探讨
  • 6.2 糖肾方颗粒治疗实验性大鼠DN机制探讨
  • 参考文献
  • 结语
  • 一、结论
  • 二、本课题的创新点
  • 三、展望
  • 第四部分 文献研究
  • 1 DN研究的历史
  • 1.1 中医有关DN的研究历史
  • 1.2 现代医学有关DN的研究历史
  • 2 DN研究的现状与发展趋势
  • 3 研究方法、成果与展望
  • 3.1 临床表现的病理基础
  • 3.2 预测肾脏损害的临床和实验室指标
  • 3.3 机理的深入探讨
  • 3.4 动物模型的研究
  • 3.5 中医药关于DN的现代研究
  • 参考文献
  • 附录
  • 附录1 相关英文缩写词
  • 附录2 临床研究观察表
  • 附录3 大鼠肾脏NEPHRIN蛋白免疫组化图
  • 附录4 电镜观察结果
  • 附录5 攻读博士学位期间发表论文及参编论著
  • 致谢
  • 相关论文文献

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