虚寒、虚热状态大鼠肝组织DNA甲基化水平的研究

论文摘要

本研究为国家“973”计划课题《基于“药性构成三要素”的中药药性实质研究》（课题编号2007CB512605）的一部分,中药药性理论是中药临床应用的基础与指导,该课题着重考察中药药性形成和药性表达的诸种因素,提出“药性是药物作用于机体状态的、与化学成分相关的生物效应的概括和归纳”工作假说,即“三要素”学说,认为机体状态、化学成分及生物学效应是构成药性的三要素。其中,机体是药物发挥作用的载体,是功效产出的依托,是构成药性的重要要素。不同的机体状态如何用各种生理指标进行表征,以及不同状态如何影响药物生物效应的表达是研究的内容之一本课题组前期的研究结果表明虚寒、虚热状态大鼠肝脏代谢酶水平较正常组降低。DNA所携带的遗传信息的正确表达是合成代谢酶的前提,DNA甲基化作为表观遗传学的内容,能够通过影响基因的表达而改变其功能。DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶催化下,利用S-腺苷甲硫氨酸提供的甲基,将胞嘧啶的5位碳原子甲基化,使胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶。哺乳动物中DNA甲基化主要位点是CpG二核苷酸对上的胞嘧啶,在人类基因组中,70%-80%CpG二核苷酸对上的胞嘧啶处于甲基化状态,未甲基化的胞嘧啶主要分布在CpG岛上。近年来的研究表明DNA甲基化与肿瘤、遗传病、自身免疫性疾病和衰老的发生密切相关。关于DNA甲基化与机体状态之间的关系未见报道,本实验通过检测虚寒、虚热两种机体状态下大鼠肝组织的DNA甲基化水平,初步探讨DNA甲基化与机体状态之间的关系,并以此为切入点寻求虚寒、虚热状态大鼠肝脏代谢酶活性降低的原因。本论文实验部分共分为四节：第一节建立了大鼠肝组织DNA的提取和水解方法。提取和水解方法确定为采用酚／氯仿抽提法提取DNA,然后用核酸酶P1和牛小肠碱性磷酸酶将DNA水解为脱氧核苷。第二节建立了全基因组DNA甲基化水平的HPLC测定方法,方法学考察结果显示本法线性、准确度、重复性和样品稳定性均符合要求,本法简便,快速,重现性好,可作为大鼠肝组织DNA甲基化水平的检测方法。第三节以姜附桂方水煎液（附子、干姜、肉桂1：1：1）为造模剂复制大鼠虚热模型,检测模型组和正常组大鼠肝组织DNA甲基化水平并进行比较,结果显示,中药造模的虚热组大鼠与正常组相比DNA甲基化水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）。第四节分别以氢化可的松和地塞米松磷酸钠为造模剂复制大鼠虚寒、虚热模型,模型复制成功后给予仙茅,检测正常组、模型组和仙茅给药组大鼠肝组织DNA甲基化水平并进行比较,结果显示,各组之间DNA甲基化水平无差异（P>0.05）。本实验首次对DNA甲基化与机体状态之间的关系进行了研究,对各组大鼠肝组织DNA甲基化水平的检测结果显示,姜附桂方（附子、干姜、肉桂1：1：1）能引起基因组DNA甲基化水平的降低,氢化可的松和地塞米松磷酸钠均对基因组DNA甲基化水平无影响。姜附桂方（附子、干姜、肉桂1：1：1）引起基因组DNA甲基化水平降低的原因尚不清楚,有待进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略语
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 一、DNA概述
• 1. DNA的结构
• 2. DNA的理化性质
• 3. DNA的提取
• 4. DNA的水解
• 5. DNA的浓度测定
• 参考文献
• 二、DNA甲基化概述
• 1. DNA甲基化对基因表达的影响
• 2. DNA甲基化的生物学效应
• 3. 影响DNA甲基化的因素
• 4. DNA甲基化的检测方法
• 参考文献
• 第二部分 实验部分
• 前言
• 第一节 大鼠肝组织DNA的提取及水解
• 1. 实验材料
• 2. 方法与结果
• 3. 小结与讨论
• 第二节 全基因组DNA甲基化水平测定方法的建立
• 1. 实验材料
• 2. 方法与结果
• 3. 小结与讨论
• 第三节 中药造模虚热模型DNA甲基化水平的测定
• 1. 实验材料
• 2. 方法和结果
• 3. 小结与讨论
• 第四节 西药造模虚寒、虚热模型DNA甲基化水平的测定
• 1. 实验材料
• 2. 方法和结果
• 3. 小结与讨论
• 第五节 总结
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历