大鼠脊髓损伤与修复相关基因:生物信息学分析及SCIRR10分子特性

大鼠脊髓损伤与修复相关基因:生物信息学分析及SCIRR10分子特性

论文摘要

近年来因车祸、坠伤、工伤、地震等意外事故导致脊髓损伤的患者逐年上升。严重的脊髓损伤所导致的截瘫不仅给患者带来巨大的痛苦,而且也给家庭和社会造成了严重的负担。脊髓损伤是由于对脊髓的伤害导致的部分或全部的感觉或运动功能丧失。因此脊髓损伤与修复的研究已经成为神经医学和分子生物学的重要研究课题。自从本世纪初发现神经生长抑制基因以来,脊髓损伤与修复中的相关基因及其表达受到国内外学者的高度重视。我们课题组大量前期工作中利用基于PCR 的改良锚定消减杂交技术获取了一批大鼠脊髓原代神经元损伤后差异表达的基因。本研究利用生物信息学软件以及网上数据库对这些基因进行了结构和功能的预测,同时对脊髓损伤与修复相关新基因SCIRR10 进行了基因结构和功能的研究。根据已知的SCIRR10 基因序列,获得了该基因的3’和5’端序列。并且构建了该基因编码的蛋白SCIRP10 原核表达载体,经过诱导条件的优化及亲和纯化,获得了SCIRP10 的重组蛋白。将重组蛋白(SCIRP10)免疫BalBc 小鼠,得到了针对SCIRP10 的多克隆抗体,为单克隆抗体的制备和该基因结构和功能的深入研究奠定了基础。要对脊髓损伤与修复相关基因进行更加深入的结构和功能的研究,单克隆抗体的制备是尤为关键的一步,也是在分子水平上探索脊髓损伤与修复功能的钥匙。在今后的工作中, 我们将继续应用一系列生物技术和方法( RNAi , in-situhybridization,X-ray)对这些脊髓损伤与修复相关基因的功能、结构和CNS 表达图谱进行研究。

论文目录

  • 英文缩略词表
  • 绪言
  • 第一章 与脊髓损伤与修复相关基因的生物信息学分析
  • 实验材料
  • 实验方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第二章 大鼠脊髓损伤与修复相关基因SCIRR10 的ORF 克隆、表达载体构建
  • 实验一:RACE-PCR 法获得SCIRR10 基因3’末端
  • 实验材料
  • 实验方法
  • 结果
  • 讨论
  • 实验二:电子拼接获得SCIRR10 的5’端未知序列
  • 实验材料
  • 实验方法
  • 结果
  • 讨论
  • 实验三:SCIRP-10重组蛋白质表达载体构建
  • 实验材料
  • 实验方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第三章 SCIRR10 重组蛋白质表达,多克隆抗体制备
  • 实验材料
  • 实验方法
  • 结果
  • 讨论
  • 总结
  • 参考文献
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 作者简介
  • 相关论文文献

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