论文题目: CDHS801光动力学杀伤膀胱癌机理的试验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 郑景存
导师: 张元芳,吴忠,王翔
关键词: 膀胱癌,细胞,光动力学,凋亡,光敏剂
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 研究目的:光动力学治疗(Photodynamic Therapy,PDT)关键是光敏剂。CDHS801作为国产新型第二代光敏剂,虽然临床应用中可以有效治疗膀胱癌,但杀灭膀胱癌机理还不清楚。本研究旨在探讨CDHS801在膀胱癌中的亚细胞分布以及光动力学治疗膀胱癌的机理,为其临床治疗膀胱癌提供科学依据。 研究方法:1 以膀胱癌T24细胞为研究对象,将CDHS801与T24细胞孵育后,采用激光共聚焦扫描显微镜为成象工具,采用线粒体特异性染料标记线粒体,研究药物在细胞内的亚细胞分布。2 体外培养膀胱癌T24细胞,应用MTT法检测CDHS801结合650nm波长激光对膀胱癌细胞的生长抑制作用,探讨CDHS801光动力学治疗对T24细胞的体外杀伤作用。3 采用倒置相差显微镜观察PDT后细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞散射光能力的变化,检测PI染料标记的DNA变化检测细胞凋亡;应用Hoechst-33258染色细胞核DNA,荧光显微镜下观察细胞形态变化;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞有无调亡;采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,判断细胞线粒体形态变化和有无发生凋亡。4 采用Western Blotting方法检测T24细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白和胞浆细胞色素C的表达,应用实时荧光定量PCR方法,检测细胞Bcl-2、Bax基因mRNA的表达情况,探讨CDHS801光动力学诱导T24细胞凋亡的机理。5 以T24细胞接种裸鼠,制成膀胱癌动物模型,采用HE染色、TUNEL和电镜观察PDT后肿瘤的变化,研究CDHS801体内光动力学杀伤肿瘤的机理。 研究结果:1 CDHS801与膀胱癌T24细胞共同孵育后,药物进入细胞后聚集在线粒体中。2 CDHS801结合650nm波长激光照射,体外可以有效地杀伤膀胱癌细胞,杀伤效应呈剂量依赖性关系。3 T24细胞同25.0μg/ml的CDHS801孵育后,经激光照射,倒置相差显微镜下发现细胞皱缩,变小变圆,细胞浆浓缩,细胞相互之间分离,部分细胞浮起。荧光显微镜下见PDT组细胞染色质边集浓染、细胞核皱缩甚至破裂。流式细胞仪检测发现试验组细胞正散射光的能力降低,PI染色细胞核DNA后,检测发现亚二倍体区出现凋亡峰。TUNEL检测PDT组细胞核内出现棕黄色颗粒,电镜发现细胞核内染色质浓聚边集,在核膜下形成新月体样改变。对照组无这些表现。4 PDT组细胞胞浆内出现了由线粒体释放出的细胞色素C,试验组细胞Bcl-2蛋白减少,Bax蛋白变化不明显,Caspase-3、
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 国产新型光敏剂CDHS801亚细胞定位研究
材料与方法
结果
讨论
参考文献
第二部分 CDHS801光动力学杀伤膀胱癌机理的体外试验研究
一、CDHS801对T24细胞生长抑制作用
材料与方法
结果
讨论
参考文献
二、CDHS801光动力学杀伤膀胱癌T24细胞的机制
材料与方法
结果
讨论
参考文献
三、CDHS801光动力学诱导T24细胞凋亡的机制
材料与方法
结果
讨论
参考文献
第三部分 CDHS801光动力治疗膀胱癌的体内试验研究
材料与方法
结果
讨论
参考文献
结论
附录
综述1 光动力学治疗在膀胱癌中的应用
综述2 一种新型的膀胱癌诊断方法：光动力学诊断
中英文名词对照
发表论文(第一作者)和奖励情况
致谢
论文独创性声阳
论文使用授权声明
发布时间: 2005-09-19
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