瘦素对体外培养软骨细胞分泌NO和MMP-13的影响

论文摘要

目的:通过瘦素对体外培养兔关节软骨细胞的干预,检测瘦素对兔关节软骨细胞分泌NO和MMP-13的影响,探讨其在OA发病过程中的可能机制,为防治骨关节炎、保护软骨细胞的功能提供一定的理论和实验依据。方法:为检测瘦素干预软骨细胞后对其NO分泌的影响,引入经典的炎性细胞因子TNF-α,以其刺激软骨细胞后,软骨细胞分泌NO浓度为参照,对比瘦素单独或与TNF-α联合干预后软骨细胞分泌NO的浓度。设空白对照组、TNF-α组、不同浓度瘦素组单独或与TNF-α联合,共10组。获取2月龄兔原代软骨细胞,并进行培养和免疫细胞化学鉴定。将第3代软骨细胞饥饿12小时（无血清培养）,将各组与软骨细胞共同孵育48小时,提取细胞上清液,硝酸还原酶法测定其NO的浓度。对各组NO浓度进行方差分析。检测瘦素干预软骨细胞后对其MMP-13分泌的影响,设瘦素10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和空白对照组。将不同浓度瘦素与饥饿12小时后的第3代软骨细胞共同孵育48小时和96小时,ELISA（双抗夹心法）测定细胞上清液中MMP-13的浓度。对各组MMP-13的浓度进行析因分析。结果:空白组NO浓度为5.95±0.51μmol/L,不同浓度瘦素组NO浓度与空白组差别无统计学意义（P＞0.05）TNF-α10ng/ml组NO浓度为10.71±0.89μmol/L,与空白组差别有统计学意义（P＜0.05）。将TNF-α10ng/ml加入不同浓度的瘦素组后,测得NO浓度与空白组及TNF-α组差别有统计学意义（P＜0.05）,并呈剂量依赖性升高,瘦素浓度在10～15μg/ml时,其量效关系达到最佳。空白对照组并未测出MMP-13的存在,瘦素10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml不同浓度组测得MMP-13浓度在剂量主效应和时间主效应均有统计学意义（P＜0.05）。结论:瘦素在体外能协同TNF-α促进兔关节软骨细胞分泌NO、能促进软骨细胞分泌MMP-13。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 第一章 材料
• 1.1 主要仪器和设备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 实验动物
• 第二章 方法
• 2.1 兔原代关节软骨细胞分离、培养和鉴定
• 2.1.1 细胞取材、消化、培养、传代
• 2.1.2 软骨细胞II型胶原免疫细胞化学鉴定
• 2.2 瘦素单独或与TNF-α联合作用于兔关节软骨细胞后，测定细胞上清液中NO的含量
• 2.2.1 实验分组
• 2.2.2 细胞种板
• 2.2.3 细胞培养的上清液标本的获取和保存
• 2.2.4 NO的检测
• 2.3 瘦素作用于与兔关节软骨细胞后，测定细胞上清液中MMP-13的含量
• 2.3.1 实验分组
• 2.3.2 细胞种板
• 2.3.3 细胞培养的上清液标本的获取和保存
• 2.3.4 MMP-13的检测（双抗夹心法）
• 2.3.5 计算
• 第三章 统计分析原理
• 第四章 结果
• 4.1 倒置相差显微镜观察
• 4.2 培养细胞II型胶原免疫细胞化学检测
• 4.3 附图
• 4.4 各实验组NO浓度及统计分析
• 4.5 不同浓度瘦素作用于软骨细胞后MMP-13的浓度及分析
• 第五章 讨论
• 5.1 NO是OA的发病中的重要介质
• 5.2 MMP-13是软骨基质降解的最重要因素之一
• 5.3 瘦素促进OA病程的进展
• 小结
• 第六章 结论
• 参考文献
• 综述
• 1 瘦素与瘦素受体
• 2 瘦素对软骨生长板的作用
• 3 瘦素与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）
• 4 瘦素与骨性关节炎
• 5 小结
• 参考文献
• 致谢
• 读研期间发表的论文及研究成果