论文摘要
目的：乙肝病毒（HBV）的慢性感染与肝细胞癌（HCC）之间存在着密切的联系，然而HBV诱发HCC的确切机制仍不十分清楚。有研究表明，乙肝病毒X基因（HBV X）及其编码的蛋白在HCC的发生中起着重要的作用，为进一步探讨HBV X基因在与HBV相关HCC发生发展中的作用，李涛等以人源性永生化非瘤性肝细胞株QSG-7701为研究对象，建立了HBV X基因真核表达载体pCMV／X并将其导入QSG-7701细胞，获得了可稳定表达HBV X基因的肝细胞株pCMV X／QSG7701，为HBx致癌机制的研究建立一个高蛋白表达的细胞模型。而我将利用这个细胞膜型，进一步研究HBX转染的QSG-7701细胞的生物学及其形态学方面的变化，为治疗HBV相关的HCC找到新的突破口。方法：①pCMV X／QSG7701细胞、pRcCMV2／QSG7701细胞、QSG7701细胞分别复苏和培养。②用免疫荧光的方法检测pCMV X／QSG7701细胞中HBX蛋白的表达和分布。③用RT-PCR方法检测细胞中c-Myc、Bcl-2 mRNA的表达。④用免疫细胞化学法检测细胞中e-Myc、Bcl-2蛋白的表达。⑤用光镜及电镜观察细胞形态学的变化。结果：①．HBX蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆。②用RT-PCR方法分别检测三种测细胞中c-Myc、Bcl-2 mRNA的表达，结果表明pcmv／x转染细胞中c-Myc mRNA的表达水平较其他两组明显升高（P＜0.01）。Bcl-2 mRNA在三组细胞中均有表达，但表达水平无明显差异（P＞0.05）。③用免疫细胞化学法分别检测三种细胞中c-Mya、Bcl-2蛋白的表达，检测表明pcmv／x转染细胞株中a-Mya蛋白的表达水平较其他两组明显升高（P＜0.01），Bcl-2蛋白在三组细胞中均有表达，但表达水平无明显差异（P＞0.05）。④．光镜和电镜下对pCMV X／QSG7701细胞、pRc-CMV2／QSG7701细胞与0SG7701细胞进行观察，发现pCMV X／QSG细胞的胞核较大，核膜显得增厚，核仁肥大且增多，核／浆比例失调，可见少量多核巨细胞。pRc-CMV2／QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常，染色质分布均匀，胞核大小及形态也是正常的。结论：本研究发现，HBX转染的永生化非瘤性肝细胞QSG7701中（pCMV X／QSG7701细胞），HBX蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆中。在mRNA及蛋白水平分别检测了三种细胞中c-Myc的表达情况，结果显示转染了X基因的QSG7701细胞中c-Myc的表达水平较其他两组明显升高，表明HBX能够上调c-Myc的表达。在mRNA及蛋白水平分别检测了三种细胞中Bcl-2的表达情况，Bcl-2在三种细胞中均有表达，但表达水平无明显差异，与其他研究者的结果存在差别，其原因有待进一步研究。通过形态学的观察发现pCMV X／QSG7701细胞的胞核较大、核仁肥大且增多、核／浆比例失调、提示转染了X基因的细胞有明显恶化生长的倾向。