BAMBI在非小细胞肺癌中的表达

论文摘要

前言肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，也是全球恶性肿瘤致死的首要因素。据报道，目前我国肺癌发病率每年增长26.9％。因此，加强以肺癌分子生物学等领域为基础的肺癌病因学研究，从而探讨其发病机理及治疗方法具有极其重要的意义。BAMBI（BMP and activin membrane-bound inhibitor）基因定位在10号染色体p12.3-p11.2区域，编码产物为一个由260个氨基酸组成的跨膜糖蛋白，分子量29108道尔顿，又称作伪受体（pseudoreceptor）、NMA（non-metastatic gene A protein），属于BAMBI家族。该家族成员与转化生长因子-β（the transforming growth factor-β，TGF-β）、骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）、激活素（activin）等配体的Ⅰ型受体胞外区都具有相似的结构。因此BAMBI能够整合到配体．受体复合物中，并与TGF-βⅡ型受体形成聚合物，但由于它不具有TGF-βⅠ型受体所特有的丝氨酸／苏氨酸激酶结构域，所以不能磷酸化胞浆内的Smad蛋白，从而在受体水平上阻滞TGF-β信号转导。有研究表明，对于肺癌等上皮组织来源的肿瘤而言，TGF-β可以抑制肿瘤细胞的增殖，而BAMBI在TGF-β信号通路中的负调节机制对肺癌的作用目前尚不清楚。另外，据报道BAMBI在人结肠癌、肝癌中均存在表达上调，但在非小细胞肺癌中的表达尚未明确。目的检测BAMBI在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）组织中的表达情况，探讨其与NSCLC临床病理因素之间的关系；同时观察BAMBI在非小细胞肺癌细胞系中的表达分布情况，并探讨其表达与NSCLC病理分型及侵袭潜能之间的关系。实验材料与方法一、非小细胞肺癌组织及细胞系63例NSCLC及癌旁正常组织标本用于免疫组织化学检测。其中31例新鲜肺癌组织及癌旁正常肺组织标本，术后立即投入液氮速冻之后，于-70℃保存，用于RT-PCR检测。三株NSCLC细胞系包括人肺腺癌细胞系A549、人肺巨细胞癌高侵袭潜能的亚系BE1以及人肺巨细胞癌低侵袭潜能的亚系LH7用于免疫荧光技术、RT-PCR以及Western blot检测。二、半定量RT-PCR用RNAout提取总RNA，合成BAMBI、GAPDH引物，应用两步法RT-PCR试剂盒合成cDNA链，然后进行PCR扩增。产物经2％琼脂糖凝胶电泳，用自动电泳凝胶成像分析系统采集图像，测定条带积分光密度值。三、免疫组织化学染色组织经多聚甲醛固定，制成石蜡切片进行免疫组化SP法染色，一抗1：200稀释，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。用显微镜观察采集图像。四、细胞培养A549细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基；BE1及LH7细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基。所有细胞都在37℃、5％CO2条件下孵育。五、Western blot检测离心收集细胞，加入适量裂解液，离心取上清。蛋白定量后电泳、转膜，封闭后加入一抗（1：1000）4℃过夜。次日加入二抗（1：10000）常温2h，加入ECL试剂暗室曝光，用自动电泳凝胶成像分析系统采集图像，测定条带积分光密度值。六、免疫细胞荧光染色细胞爬片，用多聚甲醛固定，封闭后加入一抗（1：200）4℃过夜，次日加入FITC标记的二抗（1：100）室温2h，PI（1：1000）核复染，封片。应用激光共聚焦扫描显微镜系统观察采集图像。结果BAMBImRNA在癌旁组织中有较弱的表达，其在癌组织中的表达高于相应的癌旁组织（0.358±0.135vs0.249±0.129），两者差异具有显著性意义（P=0.003）。BAMBI蛋白主要表达在胞膜和靠近胞膜的胞浆，其在癌组织中的表达高于癌旁组织，两者差异具有显著性意义（P＜0.01）。BAMBI mRNA在A549中的表达低于BE1及LH7（0.574±0.035，0.731±0.051，0.734±0.049）。分别比较，差异具有显著性意义（P＜0.001）。BE1、LH7中BAMBImRNA表达差异无显著性意义（P=0.216）。A549及BE1、LH7中BAMBI蛋白相对含量分别为0.769±0.103，0.963±0.061，0.957±0.048。A549中蛋白表达显著低于BE1、LH7（P＜0.001），而BE1和LH7之间的差异无显著性意义（P=0.096）。BAMBI在A549细胞膜上的染色强度较弱，且呈现颗粒状不均一性；BE1、LH7胞膜的染色较强，连续且均匀一致。结论BAMBI的异常高表达与NSCLC的发生有关，其在肺鳞癌中的表达低于肺腺癌，在肺巨细胞癌中的表达高于肺腺癌，且其表达高低可能与肺巨细胞癌的侵袭潜能无关。

论文目录

• 一、摘要
• 中文论著摘要
• 英文论著摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 前言
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 本研究创新性的自我评价
• 参考文献
• 四、附录
• 综述
• 在学期间科研成绩
• 致谢
• 个人简介