Jab1降解9-1-1引发DNA损伤修复障碍的机制研究

论文摘要

DNA损伤是细胞生命中的常见现象。各种各样的环境因素均可持续损害细胞内的遗传物质。这些因素包括来自太阳光的紫外线、电离辐射等外源因素，和来自体内物质代谢的氧化剂等内源因素。在长期的进化过程中，针对各种代谢和外界来源的DNA损伤的因素，地球上的生物逐渐发展出一套完整的修复DNA损伤的机制，那就是高度保守的DNA损伤检控点和DNA修复。 DNA损伤检控点是指当DNA损伤时，延迟或阻滞细胞周期的生化过程。当DNA损伤时，该检控点途径的激活，能防止损伤的或复制不完全的遗传物质的传播，给细胞以足够的时间在细胞周期重新开始前，修复DNA损伤；或损伤过大时，启动凋亡或细胞衰老程序。DNA损伤检控点途径的缺陷，可引起突变的传播，导致其在体内的积累。而突变在体内的积累目前被认为可能是肿瘤发生最主要的原因。因此，DNA损伤时，DNA损伤检控点途径的激活，是维持遗传物质（染色体）的稳定性、抑制肿瘤发生所必需的。 Rad9-Rad1-Hus1（9-1-1）复合体是DNA损伤检控点途径中重要的感受器，DNA损伤时，该复合体在RFC-Rad17的帮助下，与损伤

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 Jab1与9-1-1相互作用的鉴定
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 质粒、菌株和细胞株
• 1.2 主要试剂
• 2.方法
• 2.1 免疫共沉淀（immunoprecipitation,IP）
• 2.2 9-1-1真核表达质粒的的鉴定及大量抽提
• 2.3 GST蛋白质in vitro pull-down
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 Jab1对细胞中9-1-1表达水平和功能的影响
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 质粒、菌株和细胞株
• 1.2 主要试剂
• 2.方法
• 2.1 Jab1真核表达质粒的鉴定及大量抽提
• 2.2 脂质体介导的细胞转染
• 2.3 逆转录病毒载体的构建
• 2.4 逆转录病毒的包装
• 2.5 逆转录病毒感染Pancl／V79细胞
• 2.6 免疫印迹（Western Blot）检测
• 2.7 siJab1表达载体的构建及大量制备
• 2.8 Jab1 siRNA表达载体转染293T细胞
• 2.9 HPRT基因突变实验
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 DNA损伤对Jab1介导的9-1-1调节的影响
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 质粒和细胞株
• 1.2 主要试剂
• 2.方法
• 2.1 UV型DNA损伤模型的建立
• 2.2 无DNA损伤刺激时,Jab1与9-1-1的免疫共沉淀
• 2.3 DNA损伤刺激时,Jab1与9-1-1的免疫共沉淀
• 2.4 细胞的UV assay
• 2.5 细胞的HU assay
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第四部分 Jab1调节细胞中9-1-1的机制
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 质粒和细胞株
• 1.2 主要试剂
• 2.方法
• 2.1 Pulse-chase assay
• 2.2 蛋白酶体依赖的降解实验
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 攻读博士学位期间发表的学术论文
• 个人简历