马尔尼菲青霉在d1hA基因的克隆及基因功能的初步研究

论文摘要

马尔尼菲青霉菌是一类两相条件致病真菌,在25℃培养呈现腐生菌丝态,无致病性,37℃早现酵母态,有致病性。尽管它具有非常重要的医学研究价值以及独特的温度调控的两相转换机制,但对马尔尼菲青霉的研究由于基因组信息和有效操作方法的缺乏而受到局限。在我们的研究中,一个3936bp的新基因dlhA被成功克隆到。dlhA和在皮生芽孢菌中发现的起全局调控作用的基因drk1具有高度保守性。我们构建了RNA干扰表达盒,表达盒内具有目的基因编码序列430bp的反向重复序列并被gus基因隔开。整个干扰载体借助根癌农杆菌体系成功转化马尔尼菲青霉,并在一个可控的木糖诱导启动子xylP调控RNA干扰。研究发现dlhA基因沉默的转化子形态学发生了明显的变化,而且丧失了产孢能力。实验结果表明dlhA在不同温度下调节不同的信号途径,对于研究的极性生长,可能的两相转换机制以及作为药物靶点的筛选都具有重要的意义。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 绪论
• 1.1 马尔尼菲青霉菌的背景及研究意义
• 1.2 马尔尼菲青霉遗传操作体系
• 1.3 双组分系统介绍
• 1.4 本论文的研究基础及主要内容
• 第二部分 实验材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 第三部分 实验结果
• 3.1 基因序列的拼接
• 3.2 根癌农杆菌介导转化及转化子验证
• 3.3 RNA干扰效果检验
• 3.4 干扰株表型变化检验
• 3.5 定量PCR初步筛选dlhA下游基因
• 第四部分 实验讨论
• 4.1 dlhA编码一个胞浆型组氨酸激酶
• 4.2 RNA干扰有效下调了目的基因的表达
• 4.3 dlhA影响细胞形态变化和产孢能力
• 4.4 dlhA影响马尔尼菲青霉极性生长
• 4.5 dlhA在不同温度下可能参与信号通路不同
• 4.6 实验总结与展望
• 参考文献
• 致谢