论文摘要
研究论文一乙二醛酶Ⅰ基因Ala111Glu多态性与糖尿病合并冠心病的关系背景和目的乙二醛酶Ⅰ（GLO-Ⅰ）是丙酮醛（MG）的生理解毒酶系统——乙二醛酶系统重要组分之一,能将具有糖基化毒性和致突变性的MG转化为无毒的乳酸盐而排除体外。研究显示,编码GLO-Ⅰ基因的第4外显子具有Ala111Glu基因多态性,此突变所对应的氨基酸位点与GLO-Ⅰ的功能区中的Glu99位点在3D结构上接近,且此单核苷酸多态性（SNP）能对GLO-Ⅰ的酶活性产生一定的影响。本研究旨在探讨我国北方地区汉族人GLO-Ⅰ基因的Ala111Glu多态性对脂代谢、糖代谢的影响,及其与冠心病、糖尿病和糖尿病合并冠心病的关系,为糖尿病及其合并症的筛查与防治提供依据。对象与方法研究对象均为我国北方地区汉族人群,包括161例健康人对照组、99例2型糖尿病患者（DM组）、102例冠心病患者（CHD组）和71例糖尿病合并冠心病的患者（DM+CHD组）。采用改良碘化钠法提取基因组DNA,聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法分析GLO-Ⅰ基因的Ala111Glu多态性。高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）采用直接匀相法测定;血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）采用酶法测定;血糖（GLU）采用葡萄糖氧化酶法测定;糖化血红蛋白（HbAlc）采用低压层析法测定,血清尿素氮（BUN）采用酶法测定,肌酐（Cr）采用苦味酸法测定,尿酸采用尿酸酶法测定。SPSS11.0统计软件进行统计学分析。结果1.糖尿病组、冠心病组及糖尿病合并冠心病组血清BUN、TC、TG和LDL-C水平明显高于对照组,血清HDL-C水平明显低于对照组。2.我国北方地区汉族人群GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性等位基因频率C、A分别为0.103、0.897。等位基因的频率分布与阿拉斯加人、南欧人、东欧人、南美人、非洲人、中东人和印度人存在差异。3.对照组、DM组、CHD组和DM+CHD组的GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的基因型频率分布与性别、高血压家族史和体重指数等无明显相关。4.GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性与HbAlc及血清BUN、Cr、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平无明显相关。5.不同组GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的基因型与等位基因频率分布无差异,该SNP不是糖尿病合并冠心病发生的危险因素。6.Logistc回归分析显示,本研究对象患糖尿病合并冠心病的性别,年龄和HbAlc水平与其他各组存在显著差异,年龄、性别（男性）和HbAlc的P值和OR值分别是P＜0.05、OR=1.106;P=0.006、OR=5.636和P=0.046、OR=1.132.性别、年龄和高HbAlc水平是糖尿病合并冠心病的危险因素。结论本研究建立了碘化钠法快速提取基因组DNA,PCR-RFLP法分析GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的方法。该方法简便快捷,易于操作,非常适合大规模流行病学调查和临床实验室采用。性别、年龄和高HbAlc水平是糖尿病合并冠心病的危险因素。GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性与HbAlc及血清BUN、Cr、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平无明显相关。不同研究对象之间GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的基因型与等位基因频率分布无差异,该SNP不是糖尿病合并冠心病发生的危险因素。研究目的目的建立应用高效液相色谱（HPLC）紫外检测的方法测定人血浆中丙酮醛的浓度的方法。材料和方法材料固定相:Waters C18色谱柱（3.9mmID×150mm,4μm）;流动相:10mM磷酸缓冲液,pH=4.5,含35%乙腈;流速:1ml/min;紫外检测波长:315nm。方法取EDTA-K3抗凝血,3000rpm离心10min后,取血浆上清液200μl,加入5N的高氯酸（PCA）进行去蛋白质处理后,加入75.6μmol/L的内标准品5-甲基喹喔啉（5-MQ）50μl,以及100mmol/L的衍生化试剂邻苯二氨（o-PD）,室温下衍生化3～4h后取上清液15μl进行分析。结果在本方法条件下,人血浆中MG的浓度在0.02～10.00μmol/L范围内具有良好的线性,线性方程为:峰面积比=0.1509CMG+0.0166,R2=0.9926,高、低浓度质控样本的批内变异的CV值分别是6.49%和7.70%,批间变异的CV值分别是6.26%和4.16%,方法学回收率在99.56%～109.87%之间,本方法最低检测限度为0.02μmol/L。结论采用HPLC-UV检测人血浆中MG浓度的方法简便,灵敏度高,结果准确可靠,为临床实验室进一步研究MG提供了方法学基础。
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相关论文文献
- [1].中国北方汉族人乙二醛酶I基因Ala111Glu多态性与糖尿病并发冠心病的关系研究[J]. 现代检验医学杂志 2008(04)