桑叶多糖制备纯化工艺及降血糖活性的研究

论文摘要

桑叶多糖对糖尿病有明显的治疗作用,因此从桑叶中提取、纯化得到桑叶多糖并研究其药理学活性,对研制治疗糖尿病的新药具有重要的学术意义和实用价值。本文利用热水浸提法从桑叶中提取多糖,进行纯化精制,以提高多糖含量,并用絮凝纯化后得到的桑叶多糖进行降血糖活性方面的研究。首先,本文采用热水浸提法提取桑叶多糖,分别以不同的提取时间,提取温度,提取液pH、料液比(桑叶质量g:水体积mL)和提取次数为单因素,考察各因素对桑叶多糖得率的影响,并采用正交实验优化了桑叶多糖的水提取工艺,使总多糖的得率达2.89%;在醇沉工艺中,考察了乙醇浓度对醇沉效果的影响,确定最佳醇沉工艺条件,得到的醇沉物多糖含量为18.44%。在除蛋白工艺中,考察了盐酸法和三氯乙酸法对多糖含量和保留率的影响,发现先用三氯乙酸调至pH 5,再用盐酸调节pH至3时,多糖含量和保留率达到最高,分别为32.59%和85.42%。其次,提取液采用单因素实验优化大孔树脂纯化桑叶多糖工艺,得出最佳工艺条件,多糖含量42.16%,多糖保留率为81.54%。另外,本文利用壳聚糖絮凝剂纯化桑叶多糖,采用单因素实验和响应面实验优化得出了桑叶多糖的最佳絮凝工艺。在此工艺下,多糖保留率达90%以上,多糖含量最高可达61.59%。通过对壳聚糖絮凝纯化后多糖样品组分测定,发现样品中无机小分子含量很高,达到23.88%,其次是蛋白含量(7.83%)。最后,通过建立四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,对壳聚糖絮凝纯化后的桑叶多糖(纯度为59.22%)进行药理学活性实验,结果表明,桑叶多糖能够非常有效地降低糖尿病小鼠的血糖值,其中高剂量组的血糖抑制率达到81.14%,而且能够有效降低小鼠血清和肝脏中的MDA含量,效果优于二甲双胍阳性对照组,具有明显的降血糖和抗氧化协同作用。本文研究为天然桑叶多糖的提取与纯化工艺路线的选择提供了必要的基础,为桑叶多糖的降血糖活性提供了实验依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 桑叶多糖的化学组成与结构
• 1.1.1 多糖的含量测定
• 1.1.2 分子量测定
• 1.1.3 结构鉴定
• 1.2 桑叶多糖的药理研究
• 1.2.1 降血糖作用
• 1.2.2 抗凝血作用
• 1.2.3 其他
• 1.3 桑叶多糖的提取
• 1.3.1 热水浸提法
• 1.3.2 稀碱浸提法
• 1.3.3 超声提取法
• 1.3.4 酶法提取桑叶粗多糖
• 1.4 桑叶多糖的分离纯化
• 1.4.1 除小分子杂质
• 1.4.2 除蛋白
• 1.4.3 脱色
• 1.4.4 柱层析法、沉淀法和电泳
• 1.5 应用前景
• 1.6 研究的目的和意义
• 第二章 桑叶多糖提取及醇沉、除蛋白工艺的优化
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 实验仪器与材料
• 2.1.2 材料和试剂
• 2.1.3 桑叶多糖含量的测定方法
• 2.1.4 桑叶预处理
• 2.1.5 桑叶多糖提取工艺单因素实验
• 2.1.6 桑叶多糖提取工艺正交实验设计
• 2.1.7 桑叶多糖水提醇沉工艺的优化
• 2.1.8 桑叶多糖除蛋白工艺的优化
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制
• 2.2.2 桑叶多糖提取工艺单因素实验结果与讨论
• 2.2.3 桑叶多糖提取工艺正交优化实验结果与讨论
• 2.2.4 桑叶多糖水提醇沉工艺优化实验结果与讨论
• 2.2.5 除蛋白方法对桑叶总多糖纯化工艺的影响
• 2.3 本章小结
• 第三章 大孔树脂纯化桑叶多糖的研究
• 3.1 实验方法
• 3.1.1 材料和试剂
• 3.1.2 树脂预处理
• 3.1.3 树脂筛选
• 3.1.4 树脂纯化多糖工艺单因素实验
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 树脂筛选实验结果及讨论
• 3.2.2 树脂单因素的吸附实验结果及讨论
• 3.3 本章小结
• 第四章 壳聚糖絮凝纯化桑叶多糖工艺的研究及质量控制初探
• 4.1 实验方法
• 4.1.1 材料和试剂
• 4.1.2 壳聚糖溶液的配制
• 4.1.3 壳聚糖絮凝纯化桑叶多糖工艺的单因素实验
• 4.1.4 响应面法优化壳聚糖絮凝纯化桑叶多糖实验
• 4.1.5 粗多糖质量控制研究
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 壳聚糖絮凝纯化桑叶多糖工艺单因素实验
• 4.2.2 响应面法优化壳聚糖絮凝纯化桑叶多糖实验
• 4.2.3 粗多糖质量控制研究
• 4.3 本章小结
• 第五章 桑叶多糖降血糖活性实验的研究
• 5.1 实验方法
• 5.1.1 材料和试剂
• 5.1.2 仪器
• 5.1.3 实验方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 小鼠摄食量变化的测定
• 5.2.2 小鼠饮水量变化的测定
• 5.2.3 小鼠体重变化的测定
• 5.2.4 小鼠血糖值变化的测定
• 5.2.5 小鼠脏器指数的测定
• 5.2.6 糖尿病小鼠血清MDA含量的测定
• 5.2.7 糖尿病小鼠肝脏中MDA含量的测定
• 5.3 本章小结
• 第六章 总结与展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文