论文摘要
1990年，NIH批准了腺苷脱氨酶缺乏症的基因治疗方案之后，许多研究人员不断探索对不同的疾病进行基因治疗，其中非病毒载体在基因治疗中的应用越来越受到重视。我室进行人源基因载体的研究已久，前期实验证明，人源载体能携带外源基因在各种细胞内稳定表达。但因为人源基因载体臂的同源序列位于D、G组染色体的短臂上，有研究表明该区域染色质螺旋化程度比较高，为了进一步的提高人源基因载体介导的外源基因的表达，我们从基因的转录和翻译机制入手，认识到基因的转录除了与基因本身的转录调控序列外，还与基因所在的位置和不同程度的染色质结构变化有关。目的：我们将组蛋白乙酰转移酶基因连至人源基因载体介导EGFP基因的表达，以此研究乙酰化对人源基因表达的影响。方法：通过构建组蛋白乙酰转移酶MORF4修饰的三个人载基因载体phr-hGMBGCEGFP、phr-hGMBCEGFP及phrneo-hGMBGCEGFP，将这些质粒转染细胞Bel-7402，并通过荧光显微镜、流式细胞仪以及Western-Blot等方法对GFP蛋白表达进行检测；同时用实验室现有的未经乙酰化酶修饰的人源载体phr-chEGFP及商业化载体pEGFP-N1进行比较，来检验乙酰化修饰对人源载体携带外源基因表达的影响。结果：荧光显微镜观察及Western-Blot检测发现，经过乙酰化修饰的人源载体GFP蛋白的表达比未经乙酰化修饰的人源载体phr-chEGFP的表达明显增强；流式细胞仪对GFP蛋白的检测结果发现经过修饰的载体转染效率在原有的基础上得到了提高；HAT活性检测结果表明，没有加入GAL4结合序列的载体phr-hGMBCEGFP转染细胞后，得到了最高的HAT活性。上述实验结果表明组蛋白乙酰转移酶的修饰作用对人源载体携带GFP的表达有较大影响，有望为提高人源载体介导的外源基因表达提供新思路。
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标签：组蛋白乙酰转移酶论文; 人源基因载体论文; 绿色荧光蛋白论文;