4个绵羊群体生长激素（GH）基因PCR-SSCP检测及多态性分析

论文摘要

生长激素（GH）是动物体内重要的调节因子之一。本研究以小尾寒羊、德国美利奴羊、蒙古羊、德美寒杂交一代4个群体共135只绵羊作为研究对象,设计了5对引物对GH基因进行了PCR-SSCP多态性检测,并对多态性片段进行了测序,得到了如下主要研究结论:1.绵羊生长激素（GH）基因的PCR-SSCP检测结果表明,在所检测的第一内含子、第二外显子、第二内含子、第三外显子、第三内含子、第四外显子、第四内含子、第五外显子位点中,第三内含子、第四外显子检测到多态性基因,其余位点均未检测到多态性基因。2.对存在多态性的PCR-SSCP扩增产物进行测序,结果表明,引用GH-P4引物扩增的GH基因片段同时发生两个突变,一个在1257bp处发生G→A的突变,另一个在第1405bp处一个发生T→C的突变,从而引起基因突变,导致出现DNA多态性片段。3、对4个群体的绵羊引用GH-P4引物扩增的GH基因片段的基因频率及基因型频率进行分析,结果表明,各群体间基因A,B及基因型AA、AB、BB的频率在不同的群体间分布均不同:蒙古羊A、B基因频率分别为0.4858、0.5142,AA型、BB型、AB型三种基因型频率分别为0.2286、0.2571、0.5143;小尾寒羊A、B基因频率分别为0.3282、0.6719,AA型、BB型、AB型三种基因型频率分别为0.2188、0.5625、0.2188;德国美利奴羊A、B基因频率分别为0.6055、0.3950,AA型、BB型、AB型三种基因型频率分别为0.4737、0.2632、0.2636;德美寒杂交一代羊A、B基因频率分别为0.5750、0.4113,AA型、BB型、AB型三种基因型频率分别为0.4583、0.2947、0.2333。经基因型分布卡方检验结果表明小尾寒羊、德国美利奴羊、德美寒杂交一代3个群体在此多态位点处于哈代-温伯格不平衡,蒙古羊处于哈代-温伯格平衡。4、基因频率及基因型频率分析结果还表明,高产肉性能群体德国美利奴羊、德美寒杂交一代优势基因型为AA型;低产肉性能群体小尾寒羊优势基因型为BB型,此结果预示引用GH-P4引物扩增GH片段的基因型与绵羊产肉性可能存在一定的相关性。5.对4个绵羊群体引用GH-P4引物扩增片段PCR-SSCP基因型组成进行多态信息量（PIC）、纯合度（Ho）、杂合度（He）结果分析表明:蒙古羊、小尾寒羊、德国美利奴羊、德美寒杂交一代4个绵羊群体多态信息量分别为0.3748、0.3436、0.3629、0.3883,均属于中度多态性;纯合度分别为0.5004、0.5591、0.5226、0.4998,即:小尾寒羊>德国美利奴羊>蒙古羊>德美寒杂交一代;杂合度分别为0.4996、0.4409、0.4774、0.5002,即:德美寒杂交一代>蒙古羊>德国美利奴羊>小尾寒羊。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 第一部分 文献综述
• 1 生长激素研究进展
• 1.1 生长激素的结构、分泌和生理功能
• 1.1.1 生长激素的结构
• 1.1.2 生长激素的分泌
• 1.1.3 生长激素的生理功能
• 1.2 生长激素基因定位、结构及表达与调控
• 1.2.1 生长激素基因定位
• 1.2.2 生长激素基因的结构
• 1.2.3 生长激素基因的表达与调控
• 1.3 家畜GH 基因多态性及生产性能相关性研究
• 1.3.1 猪生长激素基因（pig Growth Hormone，pGH）
• 1.3.2 牛生长激素基因（bovine Growth Hormone，bGH）
• 1.3.3 鸡生长激素基因（chicken Growth Hormone，cGH）
• 1.3.4 羊生长激素基因（sheep Growth Hormone，sGH）
• 2 DNA 分子标记及其在育种中的应用
• 2.1 DNA 分子标记
• 2.1.1 单核苷酸多态性（SNP）标记
• 2.1.2 PCR-SSCP 标记
• 2.2 分子标记在动物育种中的应用
• 2.3 PCR—SSCP 在羊经济性状研究中的应用
• 2.3.1 群体遗传多态性的分析
• 2.3.2 绵山羊种质资源调查和保存研究]
• 2.3.3 特定功能基因或片段的分型及分子标记辅助选择
• 第二部分 绵羊GH 基因PCR-SSCP 检测、分析
• 1 研究目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 材料来源和实验地点
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 主要试剂和药品
• 2.1.4 主要试剂配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 血样的采集
• 2.2.2 基因组DNA 的提取与检测
• 2.2.3 DNA 浓度与纯度的检验
• 2.3 PCR 反应
• 2.3.1 引物设计与合成
• 2.3.2 PCR 反应
• 2.4 产物的纯化回收
• 2.5 感受态细胞的制备
• ?-T Vector Systems)'>2.6 cDNA 与载体连接以及重组质粒转化(pGEM^?-T Vector Systems)
• 2.7 质粒提取
• 2.8 筛选重组子
• 2.9 DNA 序列测定和分析
• 2.9.1 基因频率和基因型频率的计算
• 2 独立性检验）'>2.9.2 基因频率和基因型频率的差异显著性检验（χ₂独立性检验）
• 2.9.3 位点遗传纯合度（Ho）、杂合度（He）和有效等位基因数（Ne）
• 3 结果与分析
• 3.1 羊基因组DNA 的检测
• 3.2 GH 基因多态性检测
• 3.2.1 GH 基因第1 内含子和第2 外显子PCR-SSCP 多态性标记（GH-P1）
• 3.2.2 GH 基因第2 外显子和第3 内含子PCR-SSCP 多态性标记（GH-P2）
• 3.2.3 GH基因第3外显子和部分第2.3内含子PCR-SSCP多态性标记(GH-P
• 3.2.4 GH 基因部分第4 内含子和第5 外显子PCR-SSCP 多态性标记(GH-P
• 3.2.5 GH 基因第3 内含子和第4 外显子PCR-SSCP 多态性标记（GH-P4）
• 3.3 绵羊群体基因多态位点遗传学分析
• 3.3.1 绵羊群体基因多态位点基因型、等位基因频率分析
• 3.3.2 基因位点多态信息量（PIC）、纯合度（Ho）、杂合度（He）和等位基因数（Ne）分析
• 2 适合性检验'>3.3.3 绵羊群体多态位点基因型Hardy-weinberg 平衡的χ²适合性检验
• 4 讨论
• 4.1 GH-P4 引物作为绵羊产肉性等重要经济性状分子标记的可能性
• 4.2 GH-P4 引物作为做为绵羊种间亲缘关系检测辅助标记的有效性
• 4.3 GH 基因在4 个群体中遗传的稳定性
• 4.4 关于GH 基因PCR-SSCP 检测结果
• 4.5 PCR-SSCP 检测方法
• 4.6 PCR-SSCP 技术影响因素分析
• 4.6.1 PCR 扩增
• 4.6.2 检测片段大小
• 4 6.3 变性温度
• 4.6.4 凝胶浓度
• 4.6.5 电泳条件
• 4.6.6 染色方法
• 4.7 连接转化和克隆操作
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录一 缩略词表
• 附录二 实验相关溶液的配置
• 附录三 测序表
• 个人简介
• 导师简介