猪瘟病毒感染蛋白质组学研究

论文摘要

本研究首次用2-DE、2D DIGE和质谱鉴定等高通量蛋白质组学技术对感染CSFV的体外PK-15细胞、体内靶细胞——外周血单核细胞以及感染猪血清进行了比较蛋白质组学分析,获得了迄今最为完善的CSFV感染宿主细胞、宿主血清差异表达蛋白质组数据。CSFV感染的PK-15细胞蛋白质组分析鉴定了21个差异表达蛋白,这些蛋白中膜联蛋白（annexin 2）、不均一核内核糖核酸蛋白（hnRNPs）、翻译延长因子1δ（EF-1δ）等蛋白在感染细胞中上调表达,根据文献报道推测这些蛋白参与了CSFV的感染、基因组复制、病毒粒子的包装、出芽等生命循环过程;参与细胞凋亡激活途径的糖酵解酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）下调表达、具有抗氧化应激和抑制细胞凋亡功能的糖酵解酶磷酸甘油酸变位酶1（PGAM1）和抗氧化应激蛋白过氧化物酶-6 （PRDX6）、硫氧还蛋白（thioredoxin- like）上调表达,这些变化抑制了PK-15细胞的凋亡,可能是PK-15细胞感染CSFV不产生细胞病变的机制之一。CSFV感染的体内靶细胞——外周血单核细胞的差异蛋白质组分析鉴定了34种差异表达蛋白。7个不同的蛋白点均鉴定为细胞骨架蛋白——肌动蛋白（actin）,4个不同的蛋白点鉴定为膜联蛋白annexinA1,另有膜突蛋白（moesin）、粘着斑蛋白（Vinculin）、踝蛋白（talin）等细胞骨架蛋白发生上调或下调的表达变化,这表明CSFV感染诱导了细胞骨架的解聚、降解和紊乱失调。据文献报道,细胞骨架的紊乱可诱导细胞凋亡。此外,具有激活细胞凋亡途径功能的GAPDH上调表达,抗氧化应激反应蛋白过氧化物酶（Prx-1）下调表达。这些蛋白的调节变化显示CSFV感染可能通过多种途径诱导了外周血淋巴细胞的凋亡;与细胞免疫相关的血小板反应素1（Thrombospondin 1,TSP-1）下调表达,TSP-1参与免疫功能的调节,比如,TSP-1可调节T细胞行为并参与炎性T细胞的激活和克隆增殖。TSP-1的下调表达可能是CSFV诱导免疫抑制的机制之一。该研究还检测了CSFV石门株感染诱导外周血CD4+和CD8+ T淋巴细胞亚群变化动力学。此外,用2D DIGE对感染CSFV猪血清进行了差异蛋白质组分析,鉴定了14种差异表达蛋白,其中的急性期蛋白接联珠蛋白（haptoglobin）、补体成分C4a、载脂蛋白A-1（apolipoprotein A-1）已被鉴定为其它疾病如乙型肝炎病毒（HBV）或丙型肝炎病毒（HCV）感染或相关癌症的潜在生物标记。该研究鉴定的这些CSFV感染血清差异表达蛋白具有作为CSFV感染生物标记的潜在可能性,当然,这种可能性仍需和其它动物病毒感染性疾病进行比较和评估。本研究鉴定的大量差异表达蛋白体现着宿主细胞对CSFV感染的总体反应机制,为发现新的诊断、预防和治疗靶标以及揭示CSFV致病机制奠定了基础。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 病毒蛋白质组学研究进展
• 1 病毒感染蛋白质组研究常用技术
• 2 病毒粒子蛋白质组
• 3 病毒感染诱导宿主细胞蛋白质组变化
• 4 病毒感染宿主血清（血浆）蛋白质组
• 5 问题与展望
• 第二章 猪瘟病毒（CSFV）致病机制研究进展
• 1 CSFV 基因组结构
• 2 CSFV 结构蛋白与非结构蛋白
• 3 CSFV 致病机制
• 第二篇 研究内容
• 第一章 感染猪瘟病毒PK-15 细胞比较蛋白质组学分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 CSFV 感染猪外周血单核细胞（PBMC）蛋白质组分析
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 第三章 感染CSFV 猪血清差异蛋白质组学分析
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表的学术论文及其它成果
• 致谢
• 详细摘要
• 英文摘要