论文摘要
背景和目的:青光眼是致盲的主要眼病之一,占世界致盲因素第2 位。但目前对其发病机制及确切的治疗方法还存在争论。高眼压是青光眼发病的最危险因素,目前对青光眼的治疗主要是以降眼压为主。近年来,大量的研究显示青光眼视网膜神经节细胞死亡的主要方式是凋亡。随着对青光眼病理机制研究的深入,其治疗也由单一的降低眼内压的同时加强神经功能的保护,睫状神经营养因子（CNTF）可诱导多种神经细胞分化,减少神经细胞凋亡和促进细胞再生。有实验报道CNTF 可促进视网膜神经节细胞（RGCs）存活,但尚未见在体实验研究,为此,本研究利用重组腺病毒携带CNTF 基因对高眼压大鼠神经节细胞的保护作用,探讨CNTF 基因修饰节细胞应用于青光眼治疗的可能。方法: 1.利用基因重组原理,构建可表达CNTF 的腺病毒。2.利用二极管激光透巩膜烧灼小梁网60-80 点及3-5 条上巩膜静脉5 个点,眼压升高后分别于3d、14d、35d 处死大鼠分离视网膜,用半定量RT-PCR 方法检测视网膜组织中CNTF mRNA 的表达情况。3.用同样方法制成大鼠慢性高眼压模型;玻璃体内注射重组腺病毒或生理盐水,应用笔式眼压计测量眼压;在3d、14d、35d 处死大鼠,取视网膜组织,处死前行PERG检查;美蓝染色光镜下观察节细胞形态改变并作细胞记数分析;ABC 免疫组化、RT-PCR 观察CNTF 表达;测量视网膜内核层及内网层外缘至内界膜的厚度。结果: 1.重组腺病毒构建成功。病毒纯化后病毒滴度达1.6×1012PFU,NIH3T3 细胞感染实验显示,CNTF 腺病毒能有效的介导CNTF 的表达。2.正常大鼠平均眼压为18.1±2.24mmHg,激光术后3d、7d、及35d 眼压分别为21.1±2.08 mmHg、34.8±3.41 mmHg 和32.4±3.01 mmHg。在正常大鼠视网膜组织中CNTF mRNA 有微量表达,高眼压后第3d CNTF mRNA 比对照组增加45.54%;第14d明显升高,比对照组增加160.31%,第35d CNTF 表达下降与对照组无差异。而眼内注射腺病毒后CNTF 均得到了显著表达,从3d、14d 直至35d 均高效表达,与正常对
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