黑色素瘤细胞裂解物联合C型CpG ODN的抗肿瘤作用

论文摘要

因含有各种肿瘤抗原,全肿瘤细胞裂解物可能成为能够诱生多靶点抗肿瘤免疫的高效肿瘤疫苗。为了提高全肿瘤细胞裂解物的免疫原性,我们设计并筛选了系列具有新颖序列的含有非甲基化CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)。在这一过程中,筛选到了一种C型CpG ODN(BW008)。将BW008和黑色素瘤肿瘤细胞裂解物混合制成了一种BW008增强型黑色素瘤细胞裂解物疫苗(BW008 enhanced melanomacell lysate,BEMCEL),并对其抗肿瘤活性进行了研究。主要结果如下。采用小鼠B16黑色素瘤皮下荷瘤和腹腔荷瘤动物模型,发现预防性给予BEMCEL可以抑制B16黑色素瘤的生长并延长荷瘤小鼠的生存期。抗肿瘤活性的机理研究表明,BEMCEL能诱生黑色素瘤细胞特异性细胞毒性T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞,刺激小鼠产生黑色素瘤特异性免疫记忆细胞,该细胞使小鼠获得抵抗黑色瘤细胞再次攻击的能力。这项工作为研制新型的抗肿瘤疫苗提供了实验依据和思路。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词
• 前言
• 第一章 CpG ODN与肿瘤的免疫治疗（文献回顾）
• 第一节 CpG ODN及其应用
• 1.CpG ODN的发现
• 2.CpG ODN的分类及结构特点
• 3.CpG ODN的作用方式
• 4.CpG ODN的对各类免疫细胞的作用
• 5.CpG ODN的种属特异性
• 6.CpG ODN的应用
• 第二节 肿瘤及肿瘤的治疗
• 1.肿瘤的传统治疗方法
• 2.肿瘤的免疫治疗
• 第三节 肿瘤细胞裂解物肿瘤疫苗
• 1.肿瘤细胞裂解物装载的DC疫苗
• 2.肿瘤细胞裂解物与细胞因子联用
• 3.肿瘤细胞裂解物与细菌来源的佐剂联用
• 4.肿瘤细胞裂解物与CpG ODN联用
• 第二章 材料和方法
• 第一节 主要材料
• 1.试剂
• 2.CpG ODN的合成
• 3.细胞及细胞株
• 4.实验动物
• 5.荧光抗体及细胞染色相关试剂
• 6.流式细胞仪
• 第二节 主要方法
• 1.淋巴细胞增殖实验
• 2.PBMC产生的抗病毒活性检测
• 3.PBMCs表面分子的检测
• 4.肿瘤细胞裂解物的制备和定量
• 5.小鼠体内抑瘤实验
• 6.大网膜的HE组化染色
• 7.腹腔灌洗液细胞的获得及检测
• 8.小鼠体外细胞毒T细胞（CTL）活性测定
• 9.体内免疫记忆的观察
• 10.迟发型超敏反应（delayed-type hypersensitivity,DTH）的检测
• 11.统计分析
• 第三章 实验结果
• 第一节 一种新型CpG ODN的活性检测
• 1.BW008的质量检定
• 2.BW008对人免疫细胞的活化作用
• 3.BW008对小鼠脾细胞增殖的刺激作用
• 4.BW008对体外培养的B16细胞生长的影响
• 第二节 BW008增强型黑色素瘤细胞裂解物疫苗的制备和活性研究
• 1.B16肿瘤细胞裂解物的制备摸索及其质量、毒性检测
• 2.肿瘤模型的选择
• 3.BW008增强型肿瘤细胞裂解物对皮下接种的B16肿瘤生长的影响
• 4.BEMCEL对腹腔接种的B16肿瘤生长的影响
• 5.BW008的有效剂量摸索
• 6.肿瘤细胞裂解物有效成分的摸索
• 7.BEMCEL抗肿瘤活性的机理研究
• 第四章 讨论
• 第一节 C型CpG ODN的抗肿瘤应用
• 1.BW008显示C型CpG ODN的特点
• 2.C型CpG ODN进行抗肿瘤研究的优势
• 3.BW008可以治疗性单用于皮下模型
• +T细胞和CD8⁺T细胞介导的细胞免疫应答'>第二节 BEMCEL引起CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞介导的细胞免疫应答
• 第三节 肿瘤模型的选择与结果
• 第四节 全肿瘤细胞裂解物可作为最佳的抗原来源
• 第五节 预防性及治疗性免疫产生的不同结果
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间已（或待）发表的文章
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢