邻苯二甲酸酯类对青春期雄性大鼠生殖内分泌功能的影响及其机制研究

论文摘要

背景:近年来,环境因素对男性生殖健康的影响越来越引起学者们的注意。邻苯二甲酸酯类是常用的塑料制品增塑剂,有很强的拟雌激素样作用,是公认的环境内分泌干扰物,不但可以干扰下丘脑-垂体-睾丸轴的平衡,而且还可以直接或（和）间接地损害精子的生成。青春期是男性生长发育的关键时期,在此期受到外界环境不良干扰可能会影响男性生殖功能和个体的生长发育。最近,有学者认为,我们所处的环境中含有多种邻苯二甲酸酯类物质,所以我们有必要评估两种或多种邻苯二甲酸酯类混合物对人类健康的影响。邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯和邻苯二甲酸二丁酯是世界上最常用的两种增塑剂,并且人群最常见的接触方式是经口接触污染的水或食物。因此,本研究试图探讨邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯和邻苯二甲酸二丁酯联合经口染毒对青春期大鼠生殖内分泌功能的影响及其机制;这些研究对阻止、延缓或减弱上述因素对人类生殖健康的损伤有重要的意义。目的:1)研究邻苯二甲酸酯类对雄性性行为的影响及其机制。2)探讨邻苯二甲酸酯类对睾丸、附睾组织形态及生精功能的影响,并阐明生殖内分泌功能的改变在其中的作用。3)研究睾丸内与精子功能相关的酶类活性的改变以及睾丸内氧化-抗氧化系统的改变,进一步探讨这些改变在生殖功能损伤机制中的作用。4)研究睾丸中铜、锌含量及铜/锌比值的变化在邻苯二甲酸酯类引起生殖损伤中的作用。材料与方法:健康雄性SD大鼠（6周龄）56只,分笼饲养于标准动物房（22℃）,自由饮食,给予规律光照（12 h:12 h）。20只健康成年雌性SD大鼠经处理后与雄鼠交配,观察雄鼠性行为学改变。将所有雄鼠随机分为4组,每组14只,将DEHP和DBP等质量溶解于玉米油中,灌胃剂量分别为0（对照组）、375、750、1500 mg/（kg.d）。于染毒2周末各组断头法处死7只大鼠。染毒第2224天观察雄鼠性行为学的改变,染毒4周末各组断头法处死7只大鼠。每天同一时间称重,灌胃量为5ml/Kg体重。大鼠处死后收集标本,采用组织学方法分析各组睾丸曲细精管直径大小和生精上皮高度变化,流式细胞分析仪检测各组睾丸生精细胞的变化,并用放免法检测血清中睾酮和雌二醇含量的变化;采用紫外分光光度计法检测血清和睾丸匀浆液中ACP、SDH、SOD和MDA的含量变化以及染毒4周血清中NO的变化;采用石墨炉原子发光法检测睾丸组织中铜、锌含量以及铜/锌比值的变化。结果:1.大鼠性行为学观察:在30min内,对照组和750 mg/kg.d组分别有6只大鼠完成射精,而375 mg/kg.d组和1500 mg/kg.d组分别有7只和5只大鼠完成射精。插入潜伏期在1500mg/kg.d组较对照组和375 mg/kg.d组延长（P <0.05）;射精前插入次数在1500 mg/kg.d组与对照组相比差别有统计学意义（P <0.05）。2.睾丸组织形态学改变:曲细精管直径在染毒2周750 mg/kg.d组和1500 mg/kg.d组较对照组降低,染毒4周各剂量组曲细精管直径均较对照组明显减小。染毒2、4周,生精上皮高度在375 mg/kg.d组较对照组降低（P <0.05）,在750 mg/kg.d组和1500 mg/kg.d组与对照组相比降低均具有高度统计学意义（P <0.01）。3.流式细胞仪检测生精细胞的变化:染毒2、4周,亚单倍体细胞比例在750 mg/kg.d组和1500 mg/kg.d组升高;随染毒剂量增加,1C细胞和4C比例降低,2C细胞比例升高, G0/G1期细胞比例升高,G2/M期细胞比例降低。4.血清睾酮（T）、雌二醇（E2）和NO的变化:染毒2周,血清T含量在750 mg/kg.d组和1500 mg/kg.d组较对照组明显降低（P <0.01）;血清中E2在750 mg/kg.d组和1500 mg/kg.d组较对照组明显升高（P <0.05）;染毒4周,血清T和E2含量在750 mg/kg.d组和1500 mg/kg.d组与对照组相比差别均具有高度统计学意义（P <0.01）;血清中NO含量在1500 mg/kg.d组较对照组升高（P <0.05）。5.血清及睾丸匀浆中ACP、SDH、SOD和MDA活性的变化:染毒2周,血清SOD活性在1500 mg/kg.d组明显比对照组降低（P <0.05）,睾丸匀浆中ACP、SOD和MDA在1500 mg/kg.d组与对照组相比差别有统计学意义（P <0.05）;染毒4周,血清ACP活性在750 mg/kg.d组与对照组相比有统计学意义（P <0.05）,在1500 mg/kg.d组与对照组相比有高度统计学意义（P <0.01）,血清SDH活性在1500 mg/kg.d组与对照比差别有统计学意义（P <0.05）。睾丸匀浆中ACP、SDH、SOD和MDA在750 mg/kg.d组与对照组相比差别有统计学意义（P <0.05）,在1500 mg/kg.d组各项指标与对照组相比差别有高度统计学意义（P <0.01）。6.睾丸组织中铜、锌及铜/锌比值的变化:染毒2周,睾丸组织中铜含量在1500 mg/kg.d组升高（P <0.05）,锌的含量和铜/锌比值较对照组差别明显（P <0.05）;染毒4周,在1500 mg/kg.d组睾丸组织中锌含量明显降低（P <0.05）,铜/锌比值明显升高（P <0.05）。结论:1.邻苯二甲酸酯类可以引起雄性大鼠性行为的异常,其机制可能与体内性激素水平紊乱和NO水平变化有关。2.邻苯二甲酸酯类对睾丸组织形态结构有严重影响,破坏睾丸生精上皮结构的完整性,干扰生精过程。3.生精相关酶活性的改变和睾丸内氧化抗氧化系统失衡可能在邻苯二甲酸酯类引起生精功能障碍的过程中发挥了重要的作用,并且可能解释邻苯二甲酸酯类引起睾丸损伤的某些机制。4.睾丸内铜、锌含量和铜/锌比值的变化可能与邻苯二甲酸酯类引起睾丸损伤有密切关系。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 第一部分 邻苯二甲酸酯类对雄性大鼠性行为的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 邻苯二甲酸酯类对雄性大鼠睾丸形态结构及功能的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 附图
• 第三部分 邻苯二甲酸酯类对生精功能及睾丸内氧化应激的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第四部分 睾丸中铜、锌含量及铜/锌比值的变化在邻苯二甲酸酯类引起生殖损害中的作用
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 硕士研究期间发表论文
• 致谢