论文摘要
背景环氧合酶-2（cyclooxygease-2,COX-2）及5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LOX）是花生四烯酸（Arachidonic Acid,AA）代谢途径中的两个重要的关键酶,参与组织的炎症,损伤修复和纤维化过程。本实验旨在探讨COX-2及5-LOX两种酶在人肝星状细胞中的表达及功能。方法原代分离培养人肝脏星状细胞（human hepatic stellate cells,hu-HSCs）,传至第5代进行研究,分为加或不加1μg/ml内毒素（lypopolysccharide,LPS）诱导两大组,每组分别用NS398（高选择性COX-2抑制剂）、AA-861（5-LOX抑制剂）和O5636（COX及LOX的联合抑制剂）进行药物干预,设立空白对照,采用MTT法检测细胞增殖力;ELISA检测细胞培养上清液中的COX-2的代谢产物PGE2、TXB2及5-LOX的代谢产物LTB4含量;real-time quantitativePCR（qPCR）检测COX-2、5-LOX、MCP-1和IL-6的mRNA表达水平;WesternBlot法检测COX-2、5-LOX、Ⅰ型前胶原（CO1-Ⅰ）、α-SMA、CTGF、BC1-2、BAX、磷酸化/非磷酸化AKT以及磷酸化/非磷酸化ERK的蛋白表达水平。实验结果用SPSS软件作方差分析（多样本均数的两两比较）。结果qPCR及Western Blot证实COX-2及5-LOX在传代的原代hu-HSCs中均可以经LPS诱导表达。与空白对照组相比,NS398、AA-861和O5636呈剂量依赖性抑制hu-HSCs细胞增殖,伴随磷酸化AKT、磷酸化ERK及BC1-2蛋白水平的下降;同时可下调LPS诱导组细胞的MCP-1和IL-6的mRNA表达水平。NS398/AA-861可导致COX-2/5-LOX相应的下游代谢产物水平减少。结论COX-2及5-LOX在hu-HSCs中均有表达,并可经LPS诱导表达增加,二者影响hu-HSCs增殖活化、凋亡,并参与调节该细胞的炎症/纤维化表型。
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