组织工程异种无支架生物瓣膜的研制及实验研究

论文题目: 组织工程异种无支架生物瓣膜的研制及实验研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 心胸外科

作者: 邬弘宇

导师: 刘中民

关键词: 组织工程,异种,生物瓣膜,无支架,戊二醛,左旋谷氨酸

文献来源: 同济大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的：通过一种新的组织工程异种无支架瓣膜的研制，评价其在体内的结构完整性、组织细胞活性及引起的免疫反应、钙化程度，从而探求其耐久性及衰坏机理，为更进一步研究及临床应用奠定基础。方法：1血管内皮细胞的获取、培养、扩增和鉴定：取羊颈动脉，胰蛋白酶消化分离获取内皮细胞。内皮细胞移入含有10％胚牛血清、5ng／l VEGF的DMEM中进行原代培养。使用0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA消化内皮细胞，按照1：2或1：3的比例传代，扩增细胞。ELISA法鉴定内皮细胞(vWF)。2无支架生物瓣膜的制作和细胞种植：取成年猪主动脉瓣和牛心包，经0.25％戊二醛浸泡24小时后，修剪缝合，再置入戊二醛中12小时，获得无支架生物瓣膜。种植前，置入8％左旋谷氨酸中48小时，经胶原复合物和层粘连蛋白被覆后，种植上血管内皮细胞。培养10天～12天后行HE染色、von Wilibrand因子染色、扫描、透射电镜观察，同时，将内皮细胞分为培养组和种植组，ELISA试剂盒观察PGl2和cAMP在内皮细胞中的变化。3瓣膜植入试验：无支架瓣膜种植内皮细胞后，植入动物体内，用于代替肺动脉瓣。生物瓣膜按照组织工程瓣膜和非组织工程瓣膜分组，3月后超声观察瓣膜功能。然后取出瓣膜行组织学检查，包括HE染色、von Willbrand因子染色、扫描、透射电镜观察细胞存活情况。测定瓣膜的钙含量变化了解衰退情况，并观察组织工程瓣膜植入前后ICAM—1在内皮细胞上表达的变化来评价免疫反应。结果：1消化分离所得内皮细胞培养24 h后，细胞已贴壁生长，呈菊花样聚集，细胞体积较小，细胞密集，6～10 d后细胞生长成片，各细胞集落之间融合，可见铺路石样或鹅卵石样外观，von Wilibrand因子染色，内皮细胞胞膜及胞浆均染成棕色，而细胞核核仁呈蓝色。2戊二醛处理的无支架瓣膜，瓣膜柔软，肉眼观察，开闭良好，经左旋谷氨酸、胶原处理后，内皮细胞覆盖率80～90％以上，但排列紊乱，无方向性，细胞和细胞之间有重叠，内皮细胞接触紧密，但未见明显缝隙连接，内皮细胞下未见明显基底膜形成。PGI2和cAMP测定证实内皮细胞生长良好，活性正常。3植入体内10天后，非组织工程瓣膜上局部有内皮细胞附着，无细胞部位有血栓形成。组织工程瓣膜上内皮细胞覆盖尚完整，而局部有内皮细胞脱落，无内皮细胞处有白细胞黏附。植入3月后，制作的无支架异种瓣膜开闭良好，无粘连狭窄，少量反流，无明显衰退迹象。组织工程瓣膜和非组织工程瓣膜上都有连续的内皮细胞附着，细胞排列规则，连接紧密。3月后，非组织工程瓣膜钙盐沉积更加明显。组织工程瓣膜植入体内后，内皮细胞ICAM-1表达较植入前明显。结论：猪的主动脉瓣膜作为心脏瓣膜支架来源是一种可靠的，结构合理的替代品。戊二醛处理的无支架异种瓣膜经左旋谷氨酸处理后，能成功的减除戊二醛的细胞毒性，增加了组织相容性。种植的内皮细胞在体外和体内都可以成活。组织工程瓣膜在钙盐沉积上优于非组织工程瓣膜，故能增加瓣膜的耐久性。炎症反应是导致瓣膜衰退的重要原因。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

第1章 引言

第2章 动物自体细胞分离、培养、扩增、鉴定

2.1 材料和方法

2.2 结果

2.3 讨论

第3章 无支架生物瓣膜制备及细胞种植

3.1 材料和方法

3.2 结果

3.3 讨论

第4章 组织工程瓣膜的动物实验研究

4.1 材料和方法

4.2 结果

4.3 讨论

第5章 全文总结

致谢

参考文献

附录

个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果

发布时间: 2007-12-28

参考文献

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