导读:本文包含了基因的克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:石柱参,人参皂苷合成酶,SS基因,基因克隆
基因的克隆论文文献综述
王丹丹,孙英新[1]（2019）在《石柱参人参皂苷合成酶基因SS的克隆与序列分析》一文中研究指出以石柱参近缘种野生山参的人参皂苷合成酶基因SS为模板,利用NCBI中的primer-BLAST设计特异性引物,应用PCR技术从石柱参叶片基因组DNA克隆了SS基因。序列分析显示,克隆的基因片段为1 285 bp,能够编码25个氨基酸以上的ORF (Open Reading Frame)有10个,其中最长能够编码295个氨基酸。NCBI序列对比显示,该基因与人参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为97. 05%,与西洋参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为96. 63%。这些数据表明,从石柱参克隆的基因为其人参皂苷合成酶基因SS。(本文来源于《辽东学院学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
白辉,宋振君,宋丹丹,王永芳,全建章[2]（2019）在《谷子抗病相关基因SiRAR1的克隆及表达分析》一文中研究指出Mla12介导的抗性所需基因(required for Mla12-mediated resistance, RAR1)作为植物抗病信号途径中的重要元件,广泛参与植物的抗病反应。为研究谷子(Setaria italica)中SiRAR1的结构与表达特征,本研究以抗病材料'十里香'叶片cDNA和基因组DNA为模板,分别克隆到SiRAR1基因的CDS序列和启动子序列,利用生物信息学软件分析了其编码氨基酸的生物学特征,采用qRT-PCR分析该基因在谷子不同组织部位和谷子响应谷锈菌(Uromyces setariae-italicae)胁迫反应中的表达模式,用SDS-PAGE技术分析该基因的原核表达特征。结果表明,SiRAR1基因开放阅读框全长765 bp,编码254个氨基酸(GenBank No.MK814879),预测分子量为28.04 kD,理论等电点为8.13。该蛋白的最大二级结构为无规则卷曲,最小元件为β-转角。氨基酸同源性的系统进化分析表明,SiRAR1与同科植物的进化关系最近,其中与糜子(Panicum miliaceum)第12号染色体的基因假定蛋白C2845_PM12G15490 (hypothetical protein C2845_PM12G15490, GenBank No. RLM79685.1)同源性最高(92.44%)。qRT-PCR分析表明,SiRAR1基因在谷子的根、茎、叶、穗中均有表达,其中在根部的表达量最高,茎部表达量最低,孕穗期和抽穗期的穗部表达水平相近;在谷锈菌侵染处理下,SiRAR1基因在抗病材料'十里香'中于12 h开始上调表达,至36 h表达量达到峰值,在感病材料'豫谷1号'中于96 h上调表达,且在'十里香'中的表达量峰值为'豫谷1号'中的3倍(P<0.01),在豫谷1号中的表达量峰值为'十里香'中的1.6倍(P<0.05),表明较感病植株相比,SiRAR1基因在抗病植株中的上调表达时间更早、持续时间更长、表达量上调幅度更强,推测SiRAR1基因可能在谷子抗病反应的早期起正调控作用。构建的原核表达载体pET30a-SiRAR1经0.1和0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)诱导均能表达出表观分子量约为33 k D的SiRAR1融合蛋白。上述实验结果为进一步研究SiRAR1基因功能与谷子抗病机制提供了重要的理论依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
丁旭,王雅慧,李彤,张榕蓉,徐志胜[3]（2019）在《胡萝卜DcPSY2基因克隆及其在非生物胁迫响应中的表达分析》一文中研究指出类胡萝卜素(carotenoids)作为一种重要的营养物质,广泛存在于胡萝卜(Daucus carota)中。番茄红素(lycopene)是一种主要的类胡萝卜素,对植物生长发育和逆境响应有重要作用。八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase, PSY)是番茄红素合成的关键酶之一。利用RT-PCR (reverse transcription PCR)技术从胡萝卜'君川红'中克隆获得ORF长为1 317 bp、编码438个氨基酸的DcPSY2基因(GenBank No. NM_001329167.1)。将DcPSY2与其他17种植物中PSY蛋白的氨基酸序列进行多重比对,结果显示其总体相似性为82.22%,可见PSY蛋白是高度保守的蛋白质。进化关系表明,胡萝卜DcPSY2蛋白与红木(Bixa orellana) PSY蛋白进化关系最近。胡萝卜DcPSY2蛋白是亲水性、非分泌蛋白,且无信号肽,属于类异戊二烯合成C1超级家族(isoprenoid biosyn C1 superfamily)成员,在各细胞器中均有分布。二级结构预测表明,胡萝卜DcPSY2由53.65%的α-螺旋、5.48%的β-折迭、12.79%的延伸主链和28.08%的随机卷曲组成。qRT-PCR结果显示,DcPSY2基因在高温(38℃)、低温(4℃)、干旱(200 g/L PEG6000)和高盐(200 mmol/L NaCl) 4种非生物胁迫下均有明显响应。在高温和高盐胁迫下,DcPSY2基因在处理2 h后表达量达到峰值;在低温和干旱胁迫下,DcPSY2基因的表达量在处理后1 h时显着上调(P<0.05)。本研究结果为DcPSY2基因在胡萝卜生长发育中的功能研究及其在抗逆育种中的应用研究提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
侯朔,高燕会,童再康[4]（2019）在《换锦花LsMYB5基因的克隆与表达分析》一文中研究指出换锦花(Lycoris sprengeri)属石蒜科石蒜属多年生草本植物,花色为红蓝复色,是良好的鲜切花、盆花、地被和园林造景材料,具有很高的商业价值。为丰富培育花色多样的换锦花品种,本研究以换锦花花瓣转录组信息为基础,采用反转录-PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)技术相结合成功克隆了长871 bp的换锦花R2R3-MYB转录因子5基因(R2R3-MYB transcription factor 5 gene, LsMYB5) c DNA序列(GenBank No. MK779710),开放阅读框681 bp,编码226个氨基酸,LsMYB5蛋白C端含有保守的乙烯类响应元件结合因子相关的两亲性抑制(ethylene-responsive element binding factor-associated amphiphilic repression, EAR)抑制结构域(pdLNLD/ELxiG/s)和锌指结构域(CX-(1-2) CX-(7-12) CX-(1-2)C),可能具有转录抑制功能。qRT-PCR分析表明,LsMYB5基因具组织特异性表达,主要在叶片中表达;在花瓣的凋谢期的表达量最高,在颜色不同的无性系中表达量具有显着性差异(P<0.05),推测LsMYB5的表达与换锦花花色形成有关。为了进一步分析LsMYB5基因功能,本研究构建了原核表达载体pET-30(a)-LsMYB5,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),成功获得异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)诱导的表达重组蛋白,并进行了His标签蛋白纯化。该研究结果可为进一步研究LsMYB5转录因子调控的换锦花花色形成相关结构基因的筛选提供理论依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
于佳玉,朱梦瑶,许丽,刘志君,吕文秀[5]（2019）在《青岛百合花发育E类基因LtSEP3的克隆及表达分析》一文中研究指出为研究青岛百合花发育问题的分子调控机理,以青岛百合花朵为材料,克隆得到一个MADS-box家族E类基因SEPALLATA3(SEP3),命名为LtSEP3,开放阅读框为687bp,预测编码228个氨基酸。生物信息学分析结果表明,LtSEP3蛋白的相对分子质量为26 179.58D,理论等电点在8.68,不稳定系数为33.66,属于稳定蛋白,总平均亲水性(GRAVY)为-0.819,脂肪系数为79.96。氨基酸序列比对显示,LtSEP3基因编码的蛋白具有典型的MADS结构域和K-box区。LtSEP3与同为百合属植物的岷江百合的MADS蛋白的氨基酸序列亲缘关系最近;qRT-PCR分析显示,LtSEP3具有组织表达特异性,主要在花中表达,在鳞茎、茎、叶中几乎不表达,在花朵开放的中后期,LtSEP3表达量达到峰值。本研究认为,LtSEP3基因可能在青岛百合花朵开放和花发育过程中具有重要作用。(本文来源于《青岛农业大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
刘梦姚,王娟,王曼姿,高飞,张洪志[6]（2019）在《七星瓢虫保幼激素环氧水解酶基因克隆及表达分析》一文中研究指出保幼激素(juvenile hormone, JH)可以调控昆虫滞育,保幼激素环氧水解酶(juvenile hormone epoxide hydrolase, JHEH)是调节保幼激素代谢的关键酶之一。为探索JHEH在七星瓢虫Coccinella septempunctata L.滞育中的调控作用,利用RT-PCR和RACE技术克隆获得七星瓢虫JHEH全长基因,命名为Csjheh(GenBank登录号:MH932586),该基因cDNA全长2 077 bp,开放阅读框(ORF)1 380 bp,编码459个氨基酸,预测蛋白质分子量为51.39 kD,理论等电点(pI)为8.79。疏水性分析结果显示该基因具有典型环氧水解酶的N末端疏水结构。氨基酸序列比对结果表明,Csjheh与中欧山松大小蠹、赤拟谷盗、丽蝇蛹集金小蜂、内华达古白蚁保幼激素环氧水解酶同源性达到64.24%。利用实时荧光定量PCR技术研究其时空表达模式,结果表明Csjheh基因在七星瓢虫成虫初羽化阶段表达量较高,滞育诱导条件下表达量呈先下降后上升的趋势,滞育60 d时与初羽化阶段接近。本研究结果对揭示JHEH参与JH的调控作用,进而调控昆虫滞育提供了理论参考。(本文来源于《植物保护》期刊2019年06期）
张庆田,范书田,艾军,秦红艳[7]（2019）在《软枣猕猴桃L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆及原核表达分析》一文中研究指出为更好了解L-半乳糖内酯脱氢酶及编码基因在软枣猕猴桃中的生理功能及作用,以‘魁绿’软枣猕猴桃果实cDNA为模板,用RT-PCR及RACE技术,获得L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因AaGalLDH(GenBank:KP145007.1)。序列分析表明该基因全长为2 394 bp,开放阅读框为1 833 bp,编码610个氨基酸,与其它植物GalLDH氨基酸序列具有78%～95%的同源性。编码的蛋白序列具有GalLDH蛋白家族典型的保守结构域。进一步将该基因连接到原核表达载体并转化大肠杆菌进行诱导表达,经Western Blotting验证,目的基因在pET-28a表达系统中有表达,但基本为不溶性表达。这为进一步研究该酶蛋白的体外表达和功能以及选育高品质软枣猕猴桃品种奠定了基础。(本文来源于《山东农业科学》期刊2019年11期）
马瑶,何向东,夏忆,陈莹,字向东[8]（2019）在《牦牛死亡结构域蛋白(FADD)基因克隆与生物信息学分析》一文中研究指出死亡结构域蛋白(FADD)是在生物细胞里起到信号转导作用的一种蛋白,在胚胎发育、细胞凋亡过程中发挥重要的生物学活性。实验以成年母牦牛的卵巢RNA为模板,利用RT-PCR技术克隆牦牛FADD基因,并进行了生物信息学分析。结果表明:牦牛FADD基因CDS区长度630 bp,编码209个氨基酸,蛋白分子式C996H1632N300O307S7,整个蛋白质带负电荷,总共原子数量3 242;分子质量23.0 ku,半衰期30 h;理论等电点6.11;消光系数18 240;不稳定指数49.08,属于不稳定蛋白;脂肪系数104.64,平均亲水系数-0.168,预测FADD蛋白为亲水蛋白。系统进化树表明,牦牛与哺乳动物亲缘关系近,与鱼亲缘关系最远,符合物种进化规律。FADD蛋白质的二级结构α螺旋、自由卷曲、β-转角和延伸链,占靶蛋白的比例分别为71.29%、22.97%、3.83%和1.91%,与叁级结构相符。牦牛FADD蛋白有13.0%位于细胞核、52.2%位于细胞质、8.7%位于细胞外、13.0%位于线粒体、4.3%位于高尔基体和8.7%位于细胞骨架。该研究成功克隆出牦牛FADD基因CDS区,为进一步研究其功能提供了一定理论依据。(本文来源于《中国草食动物科学》期刊2019年06期）
李姿其,衣龙达,米梓萌,于卓,周沫含[9]（2019）在《日本七鳃鳗毒素肽rLj-RGD3突变体rLj-115基因的克隆与表达》一文中研究指出rLj-RGD3是一种含有3个RGD模体的七鳃鳗毒素蛋白,具有抗血栓和抗肿瘤功能。为研究3个RGD模体与其蛋白功能的关系,rLj-RGD3系列突变体的获得成为关键。rLj-115是第Ⅰ及第Ⅱ位RGD缺失、第Ⅲ位RGD保留的突变体,本研究针对其进行了基因克隆、蛋白表达及纯化。由于rLj-RGD3基因具有大量重复序列,突变体基因无法通过定点突变方法获得,故对该突变体基因进行人工合成及PCR扩增、NdeⅠ和HindⅢ双酶切,并构建于pET23b质粒。DNA测序结果显示,该重组质粒所构建序列正确。进一步对阳性重组子进行转化、诱导表达和亲和层析纯化,得到了纯化的rLj-115蛋白。rLj-115作用于人脐静脉内皮细胞ECV304的MTT试验结果表明,该合成基因表达的蛋白具有活性,可以用于后续研究。(本文来源于《水产科学》期刊2019年06期）
高丽梅,高金秀,梁蔓蔓,刘妍,姚淑敏[10]（2019）在《嗜热脂肪土芽孢杆菌GL-1 Hsp33基因的克隆及结构分析》一文中研究指出以嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)GL-1为研究对象,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得该菌株的热休克蛋白33(Hsp 33)基因,通过ExPASy、SOPMA、Pymol等在线软件对其进行生物信息学分析。同时,考察热胁迫处理对嗜热脂肪土芽孢杆菌GL-1生长的影响,并利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)研究菌株在热胁迫中Hsp33基因的表达情况。结果表明,通过PCR扩增得到碱基长度为876 bp的Hsp33基因,该基因与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)1vzy的Hsp33基因序列相似性达到99%,其表达的蛋白质结构与Bacillus subtilis 1vzy的Hsp33蛋白具有相似的核心结构域,二者除C-末端稍有不同外,具有相同的β-折迭和α-螺旋,无卷曲螺旋。热胁迫对嗜热脂肪土芽孢杆菌GL-1生长具有影响,当菌株受到热胁迫时,Hsp33基因表达量增加,说明在受到热胁迫时,Hsp33蛋白作出了应激反应。(本文来源于《中国酿造》期刊2019年11期）
基因的克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
Mla12介导的抗性所需基因(required for Mla12-mediated resistance, RAR1)作为植物抗病信号途径中的重要元件,广泛参与植物的抗病反应。为研究谷子(Setaria italica)中SiRAR1的结构与表达特征,本研究以抗病材料'十里香'叶片cDNA和基因组DNA为模板,分别克隆到SiRAR1基因的CDS序列和启动子序列,利用生物信息学软件分析了其编码氨基酸的生物学特征,采用qRT-PCR分析该基因在谷子不同组织部位和谷子响应谷锈菌(Uromyces setariae-italicae)胁迫反应中的表达模式,用SDS-PAGE技术分析该基因的原核表达特征。结果表明,SiRAR1基因开放阅读框全长765 bp,编码254个氨基酸(GenBank No.MK814879),预测分子量为28.04 kD,理论等电点为8.13。该蛋白的最大二级结构为无规则卷曲,最小元件为β-转角。氨基酸同源性的系统进化分析表明,SiRAR1与同科植物的进化关系最近,其中与糜子(Panicum miliaceum)第12号染色体的基因假定蛋白C2845_PM12G15490 (hypothetical protein C2845_PM12G15490, GenBank No. RLM79685.1)同源性最高(92.44%)。qRT-PCR分析表明,SiRAR1基因在谷子的根、茎、叶、穗中均有表达,其中在根部的表达量最高,茎部表达量最低,孕穗期和抽穗期的穗部表达水平相近;在谷锈菌侵染处理下,SiRAR1基因在抗病材料'十里香'中于12 h开始上调表达,至36 h表达量达到峰值,在感病材料'豫谷1号'中于96 h上调表达,且在'十里香'中的表达量峰值为'豫谷1号'中的3倍(P<0.01),在豫谷1号中的表达量峰值为'十里香'中的1.6倍(P<0.05),表明较感病植株相比,SiRAR1基因在抗病植株中的上调表达时间更早、持续时间更长、表达量上调幅度更强,推测SiRAR1基因可能在谷子抗病反应的早期起正调控作用。构建的原核表达载体pET30a-SiRAR1经0.1和0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)诱导均能表达出表观分子量约为33 k D的SiRAR1融合蛋白。上述实验结果为进一步研究SiRAR1基因功能与谷子抗病机制提供了重要的理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因的克隆论文参考文献
[1].王丹丹,孙英新.石柱参人参皂苷合成酶基因SS的克隆与序列分析[J].辽东学院学报(自然科学版).2019
[2].白辉,宋振君,宋丹丹,王永芳,全建章.谷子抗病相关基因SiRAR1的克隆及表达分析[J].农业生物技术学报.2019
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[8].马瑶,何向东,夏忆,陈莹,字向东.牦牛死亡结构域蛋白(FADD)基因克隆与生物信息学分析[J].中国草食动物科学.2019
[9].李姿其,衣龙达,米梓萌,于卓,周沫含.日本七鳃鳗毒素肽rLj-RGD3突变体rLj-115基因的克隆与表达[J].水产科学.2019
[10].高丽梅,高金秀,梁蔓蔓,刘妍,姚淑敏.嗜热脂肪土芽孢杆菌GL-1Hsp33基因的克隆及结构分析[J].中国酿造.2019