丙型肝炎病毒体外培养细胞模型的初步研究

论文题目: 丙型肝炎病毒体外培养细胞模型的初步研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 病原生物学

作者: 刘艳

导师: 祁自柏,张贺秋

关键词: 丙型肝炎病毒,细胞培养,感染细胞模型,复制,正链,负链

文献来源: 中国药品生物制品检定所

发表年度: 2005

论文摘要: 丙型肝炎病毒(HCV)是引起急慢性肝脏疾病的主要原因之一。丙型肝炎在全球流行范围甚广，并且由于能长期持续感染而导致预后不良，严重危害人类健康。自1989年鉴定出HCV的基因结构后，对几种蛋白的结构和生化特性也有了进一步的了解。但是由于缺乏稳定可靠的细胞培养模型等，给研究丙肝病毒的生活周期和抗病毒新药带来了极大的困难。本研究试图建立感染细胞模型，以模拟HCV感染细胞的状态，为HCV的生物学特性、抗病毒治疗和疫苗评价等研究打下基础。方法 (1)根据文献报道，选择符合要求的血清：抗HCV为阴性，而HCV核心抗原和HCV-RNA检测均为阳性。(2)选择HCV比较敏感的三株细胞L02、Raji、7701细胞，进行建立感染细胞模型的预实验。用RT-PCR法检测细胞内和培养上清中HCV-RNA正链和负链，免疫荧光染色检测HCV蛋白的表达。(3)根据预试验选择其中较为适合的7701细胞作为感染模型的靶细胞，进行HCV复制指标的检测。a)RT-PCR法检测细胞内和培养上清中HCV-RNA正链和负链，并对PCR产物进行基因测序；b)免疫荧光染色检测细胞内HCV蛋白的表达，同时用Western Blot作进一步的证实；c)用Confocal激光共聚焦成像分析阳性细胞内HCV蛋白产物的表达定位；d)通过透射电镜观察感染细胞超微结构的改变。结果 (一)选择三株细胞进行预实验：(1)筛选出两份HCV-RNA和HCV核心抗原(Core-Ag)阳性而抗体阴性的血清标本BP51和BP52，经检测基因分型均为1b型，选用荧光定量HCV-RNA相对较高的BP52感染三株细胞(Raji、L02、7701)。(2)收集感染后不同时间的样品，RT-PCR可间断检测出细胞样品中有HCV-RNA正链，负链或同时存在正链和负链(只有Raji细胞内未测出HCV-RNA负链)。(3)免疫荧光染色检测到感染一周后细胞中开始有HCV核心蛋白和NS3蛋白的表达。光镜下观察感染后2周的细胞与正常细胞相比细胞大小不一。(4)

论文目录:

中文摘要

Abstract

前言

第一部分 HCV体外感染细胞株的初步筛选

材料与方法

结果

讨论

第二部分选择7701细胞作为感染细胞，建立HCV体外感染细胞模型

材料与方法

结果

讨论

总结

参考文献

致谢

附录 1:缩略语索引

附录 2:文献综述

附录 3:已发表文章

发布时间: 2007-03-20

参考文献

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丙型肝炎病毒体外培养细胞模型的初步研究

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