肿瘤坏死因子α对成骨细胞生长及其骨形态发生蛋白受体的调控研究

论文摘要

肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）是调节骨代谢的重要因子,其浓度的改变与老年性骨质疏松（Senile Osteoporosis）及牙槽骨质丢失（Alveolar Bone Loss）等多种骨性疾病息息相关。TNF-α对于成骨细胞生长有调控作用,但其调控机制尚不明了;有资料提示TNF-α可能对于骨形态发生蛋白（Bone morphogenetic proteins,BMPs）的成骨作用有调控作用,但其调控机制未明。本文通过对于观察TNF-α对于大鼠成骨细胞增殖和分化的影响来研究TNF-α对于成骨细胞生长的调控作用,并观察TNF-α对于成骨细胞骨形态发生蛋白受体（Bone morphogenetic protein receptors,BMPRs）基因表达的调控作用,来探索TNF-α对于成骨细胞生长调控作用的分子生物学机制。目的:观察TNF-α对于成骨细胞生长的影响,研究TNF-α对成骨细胞BMPRs的调控作用,来探讨TNF-α对于成骨细胞的分子生物学调控机制。方法:1.大鼠成骨细胞的培养和鉴定:取出生一周内的Wistar大乳鼠头颅骨标本,采用酶消化法提取原代成骨细胞,DMEM完全培养基体外培养。进行三重鉴定:包括形态、碱性磷酸酶（ALP）活性和矿化结节检测。2.观测TNF-α对于成骨细胞生长的影响.采用不同浓度TNF-α诱导成骨细胞,利用MTT法检测成骨细胞增殖的变化;利用PNPP偶氮法检测成骨细胞分化情况。3.观测TNF-α对于成骨细胞各型BMPR基因表达的影响。采用不同浓度的TNF-α诱导成骨细胞,利用RT-PCR法检测成骨细胞各型BMPRmRNA量的变化,并以大鼠GAPDH基因为内参进行标准化比较。结果:1.大鼠成骨细胞培养和鉴定:成功培养出大鼠成骨细胞,并经过鉴定表明其纯度较高。2.观测TNF-α对于成骨细胞生长的影响:MTT法测定成骨细胞增殖活性,结果表明不同浓度TNF-α对于成骨细胞增殖均有抑制作用,其中TNF-α浓度大于50ng/ml时,其吸光度（OD值）有明显减少,与对照组的差异有明显统计学意义（P＜0.05）。PNPP偶氮法测定成骨细胞分化程度,结果表明,各浓度TNF-α对于成骨细胞ALP活性均有抑制作用,其中当TNF-α浓度大于5ng/ml时,其OD值有明显的统计学意义（P＜0.05）。3.观测TNF-α对于成骨细胞各型BMPR基因的表达:通过结果表明各浓度TNF-α诱导成骨细胞后BMPR-IA和BMPR-II的mRNA量均减少（P＜0.05）,BMPR-IB的mRNA的量有所增加（P＜0.05）。结论:通过结果,本研究发现,TNF-α对于成骨细胞的增殖和分化均有抑制作用,并且对于成骨细胞BMPR-IA和BMPR-II的表达有其抑制作用。根据此结果可以得出TNF-α对于成骨细胞的调控作用机制有部分是通过影响BMP信号通路来完成的,从而影响骨的代谢。该结论为研究TNF-α与骨代谢疾病的关系提供了实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 实验一:大鼠成骨细胞提取、培养和鉴定
• 材料与方法
• 实验结果
• 结论
• 讨论
• 实验二:肿瘤坏死因子α对于成骨细胞生长的影响
• 材料、方法与结果
• 结论
• 讨论
• 实验三:TNF-α对于成骨细胞BMPR表达的调控
• 材料与方法
• 结果
• 结论
• 讨论
• 全文小结
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章
• 学位论文评阅及答辩情况表