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UVA致人成纤维细胞和角质形成细胞损伤机制及白藜芦醇的光保护作用

2020-11-29阅读(625)

UVA致人成纤维细胞和角质形成细胞损伤机制及白藜芦醇的光保护作用

论文摘要

第一部分UVA对人成纤维细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶表达及一氧化氮生成的影响目的研究长波紫外线（Ultraviolet A,UVA）对体外培养的人皮肤成纤维细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶（Inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS）表达以及一氧化氮（Nitric Oxide,NO）生成量的影响,探讨UVA致人皮肤成纤维细胞损伤的机制。方法用1、5、10J/cm2剂量UVA照射培养的人原代皮肤成纤维细胞,分别采用四甲基偶氮唑盐比色实验（MTT法）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）以及Griess反应等技术检测三种不同剂量UVA照射后24h、48h、72h不同时间点人皮肤成纤维细胞的存活率、iNOS mRNA/蛋白质的表达水平以及NO生成量。结果正常人成纤维细胞在72h之内随培养时间延长细胞存活率增加,不表达iNOS,NO生成量比较低,但在5、10J/cm2剂量UVA照射后24h、48h、72h成纤维细胞存活数下降,iNOS mRNA/蛋白表达水平和NO生成量随着UVA剂量的增加升高,与同一时间点对照组相比,差异具有显著性（P＜0.001）,而且以各剂量UVA照射后24h点细胞存活数下降、iNOSmRNA/蛋白表达水平和NO生成量增高最为明显,与同剂量UVA照射后48h和72h组相比,差异具有显著性（P＜0.05或0.01）。结论UVA损伤原代培养的人皮肤成纤维细胞可能与其诱导iNOS基因的表达和NO的分泌有关。第二部分UVA对人角质形成细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶表达及一氧化氮生成的影响目的研究UVA对人角质形成细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达以及一氧化氮（NO）生成量的影响,探讨UVA致人皮肤角质形成细胞损伤的机制。方法用1、5、10J/cm2剂量UVA照射体外培养的人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色实验（MTT法）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）和Griess反应等技术分析三种不同剂量UVA照射后24h、48h、72h不同时间点HaCaT细胞增殖活性、iNOS mRNA/蛋白的表达水平和NO的生成量。结果正常HaCaT细胞随培养时间延长细胞存活率增加,iNOS mRNA/蛋白检测不出,NO生成量呈低水平;1、5、10J/cm2三种剂量UVA辐射后各时间点HaCaT细胞存活率低于相应时间点对照组,各剂量UVA辐射后24h、48h点HaCaT细胞中iNOS mRNA/蛋白的表达水平及上清液中的N0浓度高于相同时间点对照组,而且在UVA辐射后48h达到峰值,72h后iNOS mRNA/蛋白的表达均消失,培养上清液中NO浓度也明显低于同剂量UVA辐射后24h,48h时间点组（P＜0.001）。结论UVA抑制HaCaT细胞的增殖,UVA对人角质形成细胞的损伤可能与UVA诱导细胞iNOS的过度表达及NO生成增多有关。第三部分白藜芦醇对UVA照射后人成纤维细胞和角质形成细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响目的研究白藜芦醇对UVA照射后人皮肤成纤维细胞和人永生化角质形成细胞株HaCaT增殖活性、iNOS基因表达的影响,探讨白藜芦醇对UVA辐射损伤的保护作用及其可能机制。方法采用5J/cm2UVA照射成纤维细胞和永生化角质形成细胞株HaCaT细胞后,分别加入0.01mmol/L和0.1mmol/L的白藜芦醇进行干预,同时设正常对照组与UVA照射组,分别用MTT法、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western Blot）方法检测体外培养的人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞增殖能力和iNOS mRNA/蛋白的表达水平。结果原代培养的人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞经5J/cm2UVA辐射后,细胞增殖活性下降、iNOSmRNA/蛋白表达显著增加,与未受UVA辐射的对照组相比（P＜0.01 or 0.001）,经统计学分析,差异有显著性。UVA辐射后立即予以白藜芦醇处理,白藜芦醇处理组成纤维细胞和HaCaT细胞增殖活性均明显高于单独UVA辐射组,而iNOS mRNA/蛋白表达水平低于单独UVA辐射（P＜0.05）,经统计学分析,差异具有显著性意义。结论白藜芦醇能修复UVA对人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞增殖的损伤,通过下调iNOS mRNA/蛋白的表达,减少NO的合成以达到修复紫外线损伤的作用。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 英文缩写
  • 前言
  • 第一部分:UVA对人成纤维细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶表达及一氧化氮生成的影响
  • 引言
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第二部分:UVA对人角质形成细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶表达及一氧化氮生成的影响
  • 引言
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第三部分:白藜芦醇对UVA照射后人成纤维细胞和角质形成细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响
  • 引言
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 综述一
  • 参考文献
  • 综述二
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间主要研究成果

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