PC12细胞氧糖剥夺法模拟脑缺血预处理保护模型建立及其信号转导通路研究

论文摘要

目的以PC12细胞建立体外脑缺血预处理细胞模型,初步探讨NO在预处理脑保护中的作用。方法以PC12细胞建立缺血预适应模型,随机分为四组,每组五皿细胞。正常对照组:常氧,低糖（<1 g/L）2 %胎牛血清DMEM培养;缺血预适应组（IPC）:预先氧糖剥夺（OGD）6 h,后经复灌24 h和OGD处理15 h;非缺血预适应组（NIPC）:常氧、低糖低血清培养6 h,后经复灌24 h和OGD处理15 h;一氧化氮合酶抑制剂组（L-NAME）:OGD预处理前30 min加L-NAME,OGD6 h,后经复灌24 h和OGD处理15 h。通过细胞MTT代谢率、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞凋亡率来评判IPC模型是否建立,生化法观察各组一氧化氮合酶（NOS）活性变化。利用单因素方差分析,两两组间均数比较用LSD法,以P <0.05为差异具有统计学意义。结果与NIPC组比较,IPC组MTT代谢率明显增高（94.9 %±15.1 %, P <0.05）,LDH释放量减少（279.1 %±28.1 %, P <0.01）,细胞凋亡率降低;与control组比较,NIPC组及IPC组NOS活性均升高（126.1 %±10.6 %, P <0.01; 189.9 %±14.6 %, P <0.01）;流式检测结果显示:control组,IPC组,NIPC组和L-NAME组引起的细胞凋亡率分别为5.90、8.71、18.62及11.73%。结论IPC减少PC12细胞缺糖缺氧损伤后细胞的死亡与凋亡,且NO参与了此保护机制,但并非唯一因素。第二部分探讨PC12细胞氧糖剥夺预处理模型中HIF-1α的保护机制目的观察缺血预处理对低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,探讨其在脑缺血耐受中的意义。方法正常对照组:常氧,低糖（<1 g/L）2 %胎牛血清DMEM培养;缺血预适应组（IPC）:预先氧糖剥夺（OGD）6 h,后经复灌24 h和OGD处理15 h;非缺血预适应组（NIPC）:常氧、低糖低血清培养6 h,后经复灌24 hOGD处理15 h.细胞按上述三种方法处理后,提取RNA,通过RT-PCR方法观察HIF-1α及VEGF mRNA的表达。利用单因素方差分析,两两组间均数比较用LSD法,以P <0.05为差异具有统计学意义。结果IPC组HIF-1αmRNA表达量的灰度比值（1.66±0.11）,显著高于Control组（1.05±0.07, P<0.01）,同时显著高于NIPC组（1.26±0.07,P<0.05）,NIPC组与Control组相比无显著的统计学意义（P>0.05）。IPC组VEGF mRNA表达量的灰度比值（1.33±0.07）,显著高于Control组（1.00±0.06,P<0.01）,同时显著高于NIPC组（1.19±0.03,P<0.05）,NIPC组与Control组相比P<0.05差异有统计学意义。结论脑缺血预处理可以诱导HIF-1α及VEGF高表达,其可能是脑耐受产生的分子机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 PC12 细胞氧糖剥夺法模拟脑缺血预处理保护模型的建立及一氧化氮合酶的作用
• 第一节 PC12 细胞氧糖剥夺法模拟脑缺血预处理保护模型建立
• 第二节 一氧化氮合酶在缺血预处理保护效应中的作用
• 第二部分 探讨PC12 细胞氧糖剥夺预处理模型中HIF-1α的保护机制
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 发表论著
• 致谢