藏花素对膀胱癌T24细胞基因表达谱的影响

论文摘要

目的:膀胱移行细胞癌（TCCB）具有发病率、复发率高的特点,藏花素（Crocin）是从藏红花中提取的主要单一成分,具有抗癌、毒副作用小等特点。本研究旨在①探讨藏花素对膀胱癌T24细胞的作用。②利用基因芯片技术探讨藏花素抗癌作用的分子机理,分析藏花素可能作用的基因功能组。方法:①培养膀胱癌T24细胞,观察藏花素处理后的量效、时效关系。MTT法检测藏花素对T24细胞增殖活性的效应,倒置显微镜观察细胞形态改变,流式细胞术检测细胞周期变化,选出藏花素最佳作用时间和浓度。②运用高通量的基因表达谱芯片检测藏花素作用T24细胞前后基因表达谱的变化,筛选差异表达基因。③利用生物信息学方法（GO和DAVID）分析差异表达基因,挑选基因用RT-PCR和免疫细胞化学方法从分子和蛋白水平做出验证。结果:①MTT结果显示藏花素呈剂量和时间依赖性抑制T24细胞的生长;光镜观察藏花素处理后T24细胞出现凋亡的形态学改变;流式细胞术显示藏花素对细胞周期的影响存在时间依赖性,并呈明显的G0/G1期阻滞现象。②基因芯片检测发现3 mmol/L藏花素作用T24细胞48 h引起该细胞系基因表达谱广泛地改变,其中表达差异2倍以上的基因共836个,上调表达变化的486个,下调表达变化的350个,差异基因约占总体基因数量的22%。③Gene Ontology工具,针对于生物学过程,细胞组件,分子功能分析,得出基因分类信息,见文中图表。应用DAVID工具,得出既有上调基因,又有下调基因存在的通路约28条。RT-PCR检测其中的细胞周期调节相关基因p21WAF1、cyclinD1,细胞凋亡方面因子BTG2、TNFAIP3,其它方面因子TRAF4、VEGFC ,表达量变化与基因芯片结果相符,同时免疫细胞化学方法从蛋白表达水平上佐证p21WAF1和cyclinD1蛋白表达丰度与基因芯片检测的mRNA的表达趋势一致。结论:①膀胱癌的发生发展是众多基因之间相互作用的结果,而藏花素对T24细胞作用也是通过广泛的改变T24细胞基因表达谱,调控多种不同类型的基因（如细胞周期相关基因、细胞凋亡相关基因、肿瘤相关基因等）来抑制T24细胞的增殖。②基因芯片技术能从疾病及药物作用两个角度对生物体的多个参量同时进行研究.以发掘药物治疗靶点并同时获取大量作用机制的相关信息.改变了传统的一次实验仅对单个或几个基因表达差异进行观察,为多环节药物作用机制的研究提供了有利手段。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 藏花素对T24 细胞的作用
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 藏花素对T24 细胞基因表达谱的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三部分 差异表达基因的生物信息学分析及验证实验
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录