论文摘要
【目的】研究Id1基因对乳腺癌细胞增殖能力及VEGF表达的影响,探讨其在乳腺癌侵袭和转移中的作用。【方法】1.采用脂质体转染的方法将Id1-pcDNA3.1+/Hygro、Id1-pcDNA3.1-/ Hygro、pcDNA3.1转染至乳腺癌MCF-7细胞中,利用潮霉素筛选到稳定转染细胞系,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及细胞免疫组织化学法（ABC）检测Id1 mRNA和Id1蛋白在不同转染细胞中的表达状况。2.应用细胞计数及MMT法描绘生长曲线,应用流式细胞仪检测正义、反义Id1转染对MCF-7细胞细胞周期的影响,测定其增殖指数。3.应用细胞免疫组织化学法（ABC）及酶联免疫吸附实验（ELISA）检测MCF-7细胞中VEGF的表达。【结果】1.通过RT-PCR、细胞免疫组织化学法检测显示:稳定转染正义Id1质粒的MCF-7细胞Id1 mRNA、Id1蛋白表达较对照组显著增高（P<0.01）,稳定转染反义Id1组Id1 mRNA、Id1蛋白表达较对照组显著降低（P<0.01）,转染空载体组则与对照组无明显差异（p>0.05）。2.细胞计数及MTT测定显示:稳定转染正义Id1组增殖速度较对照组明显增快,在第3～5天最为显著（P<0.01）,稳定转染反义Id1组增殖速度较对照组明显减慢（P<0.05）,转染空载体组则与对照组无明显差异（p>0.05）。3.流式细胞仪检测结果显示:与对照组相比,稳定转染正义Id1组增殖指数最高（48.45±2.978）%,有显著性差异（p<0.05）,稳定转染反义Id1组增殖指数最低（23.08±1.565）%,有显著性差异（p<0.05）,转染空载体组（32.4±0.469）%与对照组无明显差异（p>0.05）。4.细胞免疫组织化学法显示:稳定转染正义Id1组VEGF蛋白表达较对照组明显增强（p<0.01）,稳定转染反义Id1组VEGF蛋白表达较对照组明显减少（p<0.01）,转染空载体组与对照组无明显差异（p>0.05）。5.ELISA检测显示:在各干预组细胞培养液中,VEGF浓度在一定时间内随时间的延长而递增。在同一时间段与对照组相比,稳定转染正义Id1组培养液中VEGF浓度显著增高,具有显著性差异（p<0.05）,稳定转染反义Id1组培养液VEGF浓度明显减低,具有显著性差异（p<0.05）,转染空载体组与对照组则无明显差异（p>0.05）。【结论】1.稳定表达正义Id1真核表达载体的细胞系中Id1表达水平明显高于对照组,而稳定表达反义Id1真核表达载体的细胞系中Id1表达明显低于对照组。2. Id1表达上调可使细胞增殖加快,Id1表达下调可抑制细胞增殖能力。3. Id1表达高低与乳腺癌VEGF分泌量正相关,提示Id1可能通过某种路径影响VEGF表达,影响乳腺癌的侵袭与转移。
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