论文摘要
目的:探讨DNA去甲基化试剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对宫颈癌Hela细胞株增殖的影响及5-Aza-CdR干预Hela细胞株后抑癌基因CDH1和HPV18E6 mRNA的表达水平的变化。方法:用不同浓度的5-Aza-CdR干预Hela细胞株24h以后,（1）四唑氮蓝（MTT）比色法检测其对Hela细胞增殖的影响:实验组设5-Aza-CdR终浓度分别为5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,对照组加入等体积DMSO,每个浓度均设5个平行孔。酶标仪检测,计算细胞活力。（2）半定量RT-PCR检测CDH1及HPV18E6 mRNA表达的改变。方差分析比较实验组与对照组之间的差别。结果:1经终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L 5-Aza-CdR处理Hela细胞24小时以后,MTT检测对照组和各实验组细胞活力（A490值）分别为:0.250±0.027,0.236±0.018,0.186±0.014,0.141±0.011,除5μmol/L组与对照组之间无明显差异以外（p＞0.05）,其余各组与对照组比较存在显著性差异（F=35.904,p＜0.05）。在一定浓度范围内随着5-Aza-CdR浓度的增加,Hela细胞活力下降,呈量效关系（相关度比较R=-0.912,p＜0.05）。2半定量RT-PCR检测结果显示实验组和对照组均在358bp处扩增出CDH1mRNA特异性条带,292bp处扩增出HPV18E6mRNA特异性条带,在550bp处扩增出β-actin特异性条带。实验组5-Aza-CdR（终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）作用Hela细胞24小时后,对照组与各实验组CDH1mRNA的相对表达水平分别为0.38±0.02、0.47±0.01、0.64±0.03、0.77±0.02,各实验组与对照组之间比较存在显著性差异（F=142.250 P＜0.05）。HPV18E6mRNA相对表达水平分别为0.45±0.03、0.46±0.02、0.44±0.03、0.47±0.03,各实验组和对照组之间比较无显著性差异（F=0.590,p＞0.05）。结论:1、5-Aza-CdR可诱导宫颈癌Hela细胞抑癌基因CDH1的表达2、5-Aza-CdR可抑制Hela细胞增殖,在一定浓度内抑制作用呈量效关系3、5-Aza-CdR上调CDH1基因的表达可能参与了抑制Hela细胞增殖4、5-Aza-CdR对宫颈癌Hela细胞株中HPV18E6mRNA表达无明显影响