论文摘要
背景：近年来，国内外已经认识到成体干细胞可以作为细胞治疗、基因治疗以及组织工程的种子细胞。本研究探讨胎盘和脐带来源的组织与细胞包括胎盘组织中贴壁细胞（human placental derived adherent cells，HPDACs）和脐动脉平滑肌细胞（human umbilical artery smooth muscle cells，HUA-SMCs）的分离、培养和鉴定及胎盘组织的低温冻存，为将来实现个体化的基因治疗及细胞治疗提供丰富的细胞和组织资源储备。第一部分目的：比较人胎盘组织的不同冻存方法、分析冻存对胎盘组织中HPDAC分离效率的影响及对HPDAC进行生物学特性分析。方法：将新鲜胎盘组织分为五组，每组20g，用搅拌机搅碎成3mm×3mm大小的组织块，分为5管，五组分别以不同浓度（5％、10％、20％、40％、60％）的玻璃化冷冻保护剂（preservation and vitrification solution，PVS2）作为抗冻剂，快速降温，置液氮中保存。冻存3个月后将该冻存组织复苏，对冻存前后的胎盘组织分别进行钠钾—ATP酶、过氧化氢酶的活力以及HPDAC的分离效率检测（组织块消化贴壁法培养30天获取的HPDAC细胞数／胎盘组织重量）。同时对上述分离的HPDAC进行形态学观察、免疫表型鉴定、生长曲线的测定以及向成骨、成脂的诱导分化。结果：发现10％PVS2组的酶学活性最高，其次是20％PVS2组，最低的是60％PVS2组；新鲜胎盘组织的HPDAC平均分离效率为：（0.575±0.30）×105个／g，冻存后胎盘组织仅有10％PVS2组能分离出HPDAC；其HPDAC平均分离效率为（0.158±0.05）×105个／g；冻存复苏胎盘组织来源的HPDAC形态学、免疫表型以及生长曲线与新鲜胎盘组织来源的HPDAC基本一致。第二部分目的：从人脐动脉中分离HUA-SMC并探索深低温保存对其生物学特性的影响。方法：取人脐动脉血管中膜组织块采用贴壁法分离原代HUA-SMC，用二步法深低温保存HUA-SMC。冻存3个月后复苏，比较冻存前后HUA-SMC的细胞形态，利用抗α-smooth muscle actin抗体进行免疫细胞化学鉴定和生长曲线等生物学特性分析。结果：显示组织块贴壁法可获得大量的梭形HUA-SMC，抗α-smooth muscle actin抗体免疫组化鉴定为阳性，冻存前后HUA-SMC在细胞形态、生物学特性上无明显差异。结论（1）本研究成功地从胎盘组织中分离得到HPDAC，具有干细胞的特征，具有向骨组织和脂肪组织分化的潜能。（2）本研究发现胎盘组织冻存复苏后，HPDAC的分离效率较低，低温冻存对胎盘组织的存活影响较大。（3）本研究成功地从人脐动脉中分离得到HUA-SMC，该细胞冻存后可以长期保存并且冻存复苏后的HUA-SMC保留了HUA-SMC的基本生物学特征，能保持较强的增殖能力并连续传代。将来可以为组织工程的种子细胞提供细胞来源。
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标签：胎盘论文; 脐带论文; 胎盘来源贴壁细胞论文; 人脐动脉血管平滑肌细胞论文; 低温保存论文;