噬菌体作为疫苗载体诱导小鼠脾细胞产生细胞因子类型的研究

论文摘要

白色念珠菌是一种寄生于健康人体的正常菌群,在机体的免疫力下降或者正常菌群失调的情况下,就会转变成致病菌。免疫抑制剂的应用增加了病人对念珠菌的易感性,使医院内患者念珠菌感染的发病率不断增加。热休克蛋白90（Hsp90）是白色念珠菌在侵染机体过程中分泌的一种毒性因子,同时,作为念珠菌的一种免疫优势抗原,可以诱导感染机体产生特异性抗体。Matthews和本实验室的工作证明,抗Hsp90的抗体是一种保护性抗体。我们课题组已经证明,噬菌体展示的表位能够诱导小鼠产生体液免疫应答和细胞免疫应答。在念珠菌感染过程中,CD4+T细胞的分化方向是决定机体对念珠菌感染抗性或易感性的重要方面。为了进一步研究噬菌体作为表位载体,诱导小鼠产生细胞因子的类型,本研究利用展示有C表位的杂合噬菌体、野生噬菌体和与匙孔血蓝蛋白（KLH）偶联的化学合成C表位（KLH-C）,免疫C57BL/6J小鼠,再采用定量ELISA方法,检测脾细胞培养上清中分泌细胞因子的水平。同时用RT-PCR方法分析了mRNA水平上细胞因子的转录,确定了检测小鼠体内脾中Th1和Th2型细胞因子的转录。得到的结果如下:1.噬菌体作为疫苗载体可以增强免疫鼠脾细胞Th1型细胞因子的转录。杂合噬菌体、野生噬菌体和KLH-C免疫小鼠体内脾中Th1型细胞因子,IFN-γ、IL-2和IL-12的转录水平相似,与TE对照组比较,差异显著。IL-10在免疫鼠和对照鼠间的转录水平相似。2.噬菌体作为疫苗载体可以诱导免疫鼠的脾细胞分泌Th1型细胞因子。杂合噬菌体免疫小鼠的脾细胞培养上清中,Th1型细胞因子,IFN-γ和IL-12的蛋白分泌水平与TE对照组比较,具有显著性差异,与KLH-C免疫小鼠相似。Th2型细胞因子,IL-10的分泌水平在免疫组和对照组之间没有差异。因此,噬菌体作为疫苗载体,能够通过增强Th1型细胞因子的转录诱导Th1型细胞因子的产生,与传统的化学载体KLH相比,具有相似的作用。而且其制备简单、省时省力的优点使噬菌体作为表位载体在疫苗研究中具有广阔的前景。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一章 文献综述
• 一、系统性白色念珠菌感染
• （一） 白色念珠菌免疫优势抗原及体液免疫应答
• 1. 白色念珠菌热休克蛋白90（Hsp90）
• 2. 分泌型天冬氨酸蛋白酶（Sap）
• 3. 热休克蛋白70（Hsp70）
• （二） 抗白色念珠菌的细胞免疫应答
• （三） 抗白色念珠菌的先天免疫应答
• 1. 中性粒细胞
• 2. 树突状细胞（DC）
• 3. NK细胞和巨噬细胞
• 二、白色念珠菌疫苗研究进展
• （一） 全菌疫苗
• （二） 表位和亚单位疫苗的研究
• 1. 抗原/ 表位的载体研究
• 2. 应用免疫佐剂来增强疫苗的免疫效果
• （三） 真菌DNA 疫苗
• 三、本论文研究意义
• 第二章 实验材料与方法
• 一、实验材料
• 二、实验仪器
• 三、实验方法
• （一） 制备和纯化展示Hsp90 表位LKVIRK的杂合噬菌体
• （二） 免疫C57bL/6J小鼠
• （三） 提取脾中的RNA
• （四） RT-PCR
• （五） 定量ELISA方法检测脾细胞培养上清中细胞因子的表达
• （六） 统计学分析
• 第三章 实验结果与分析
• 一、实验结果
• （一） 成功制备得到杂合噬菌体
• （二） 杂合噬菌体可诱导C57bL/6J小鼠Th1 型细胞因子mRNA的转录增加,对Th2 型细胞因子mRNA的转录没有影响
• 1. 小鼠脾中Th1 型细胞因子mRNA的转录增加
• 2. 脾中Th2 型细胞因子IL-10 的转录在实验组和对照组之间相似
• （三） 噬菌体增强了体外培养脾细胞的Th1 型细胞因子的分泌，对Th2 型细胞因子的分泌没有影响
• 1. 噬菌体可诱导脾细胞培养上清中Th1 型细胞因子的分泌
• 2. 噬菌体对脾细胞培养上清中Th2 型细胞因子IL-10 的分泌没有影响
• 第四章 讨论
• 一、噬菌体作为疫苗载体与KLH具有相似的作用，能够增加免疫鼠脾中TH1 型细胞因子的产生，对TH2 型细胞因子的产生没有影响
• 二、噬菌体展示表位诱导的细胞免疫应答反应
• 三、不同类型细胞因子间的调控作用
• 四、小结
• 五、本论文创新点
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文及参加项目情况