RNA干扰抑制乙型肝炎病毒复制与表达及其机制研究

论文摘要

目的:观察RNA干扰技术在抑制乙型肝炎病毒（HBV）复制与表达方面的作用,同时,对Dicer基因在RNA干扰产生机制中的作用进行探讨。方法:（1）将1.3倍HBV基因克隆入pCDNA3.1中,构建HBV真核表达载体pHBV,将其转染肝癌细胞HepG2,建立HBV瞬时表达模型,并通过ELISA、免疫荧光、Southern和Northern blot检测对该模型进行评价;（2）针对乙型肝炎病毒的四个开发放性读码框,设计并构建十种shRNA表达载体pShRNA;将pHBV和pShRNA共转染入肝癌细胞,通过ELISA、免疫荧光、Southern、Northern、Western blot和RT-PCR检测,观察HBV复制与表达受抑制的情况。（3）设计并构建两种针对Dicer基因中RNA酶Ⅲ结构域的shRNA表达载体,即pShRNA-D1和pShRNA-D2,先将其转染HepG2 2.2.15细胞和结肠癌细胞,通过RT-PCR检测,观察Dicer基因受抑的情况。将pShRNA-D1转染整合了绿色荧光蛋白（GFP）基因的HepG2 A9细胞,以抑制其Dicer基因的表达,再转染抗GFP的shRNA表达载体,观察Dicer受抑制后,是否影响后续shRNA表达载体的功能发挥,以此反映Dicer酶在RNA干扰产生机制中的作用。

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论文正文：RNA 干扰抑制乙型肝炎病毒复制与表达及其机制研究

前言

第一部分乙型肝炎病毒瞬时表达模型的建立与评价

第一节乙型肝炎病毒瞬时表达模型的建立与评价

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二节向下转膜在乙肝病毒Southern 杂交中的应用

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 RNA 干扰抑制乙肝病毒的复制与表达

第一节抗乙肝病毒shRNA 表达载体的构建

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二节 ShRNA 表达载体构建方法的优化

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三节抗乙肝病毒shRNA 表达载体转染条件的优化

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四节 RNA 干扰抑制乙肝病毒的复制与表达

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 RNA 干扰抑制Dicer 基因表达及其对干扰作用的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

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致谢

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标签：干扰论文; 乙型肝炎病毒论文;

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