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崇明水仙试管成球及离体脱毒技术研究

2020-12-07阅读(202)

崇明水仙试管成球及离体脱毒技术研究

论文摘要

崇明水仙（Narcissus tazetta var. chinensis）是上海市的特有花卉品种之一,具有悠久的栽培历史。但目前生产上分球是唯一的繁殖方式,增殖系数低,且病毒积累,造成种性退化,产量降低,阻碍其产业发展。本研究对影响崇明水仙试管球诱导和增殖的多种因素进行了探讨,建立了试管球高效诱导体系和高频增殖体系;采用DHT+高温处理、DHT+病毒唑处理等技术手段进行了离体脱毒研究。主要结果如下:1.以带鳞茎盘的鳞片为外植体时,离体诱导前应对鳞茎进行4周的冷处理。2.将鳞茎盘切成4块,在1000mg/L头孢拉定溶液中浸泡3h,污染率降至8.3%。3.适合花序轴诱导试管球的最佳培养基为MS+BA10mg/L+NAA5mg/L+蔗糖30g/L,有效诱导率达到171.3%。适合带鳞茎盘的鳞片诱导试管球的最佳培养基为MS+BA1mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L,成球率为163.6%。4.冷处理3周的内层鳞片是诱导愈伤的最佳材料,在MS+BA1mg/L+2,4-D0.1mg/L+蔗糖30g/L培养基上,诱导率和再分化率分别为48.4%和23.3%。子房愈伤诱导和再分化的最佳培养基为MS+BA10mg/L+NAA3mg/L+蔗糖30g/L,诱导率和再分化率分别为51.9%和22.2%。5.试管球增殖的最佳培养基为MS+BA5mg/L+NAA1mg/L+蔗糖40g/L,增殖率为175.0%。适当提高蔗糖浓度以40g/L为宜,AC显著降低试管球的增殖率。6.适合试管球生根的最佳培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+AC1g/L+蔗糖30g/L,生根率为90.4%。AC有利于提高试管球的生根率。7.利用DHT+高温处理后病毒含量明显降低。DHT30mg/L+病毒唑30mg/L处理能使NMAV含量降低到极微弱的水平,且不影响试管球存活;DHT10mg/L+病毒唑10mg/L处理可以完全脱除NDV和NCLV病毒,脱毒效果通过RT-PCR技术检验证实。

论文目录

  • 致谢
  • 摘要
  • Abstract
  • 引言
  • 第一章 文献综述
  • 1.1 中国水仙组织培养研究进展
  • 1.1.1 外植体选取
  • 1.1.2 预处理
  • 1.1.3 外植体消毒
  • 1.1.4 丛生芽诱导
  • 1.1.5 愈伤组织诱导
  • 1.1.6 增殖培养
  • 1.1.7 生根
  • 1.1.8 炼苗移栽
  • 1.2 球根花卉离体脱毒技术研究进展
  • 1.2.1 植物脱毒常用技术
  • 1.2.2 重要球根花卉离体脱毒技术研究进展
  • 1.2.3 植物病毒主要检测技术
  • 1.3 水仙病毒病研究进展
  • 1.3.1 水仙病毒病种类
  • 1.3.2 中国水仙病毒病种类及危害症状
  • 1.3.3 水仙病毒脱除技术研究进展
  • 1.3.4 水仙病毒检测技术研究进展
  • 1.4 本研究的背景与总体设计
  • 1.4.1 研究背景
  • 1.4.2 研究目的
  • 1.4.3 研究内容
  • 1.4.4 研究技术路线
  • 第二章 崇明水仙高效离体诱导技术体系的建立
  • 2.1 材料及试剂
  • 2.1.1 材料来源
  • 2.1.2 主要仪器和设备
  • 2.1.3 主要试剂
  • 2.2 方法
  • 2.2.1 鳞茎冷处理试验
  • 2.2.2 外植体消毒试验
  • 2.2.3 丛生芽途径诱导试管球
  • 2.2.4 愈伤组织的诱导和再分化
  • 2.3 结果与分析
  • 2.3.1 鳞茎冷处理时间对离体诱导的影响
  • 2.3.2 鳞茎消毒方式对污染和试管球诱导的影响
  • 2.3.3 不同激素配比对丛生芽途径诱导试管球的影响
  • 2.3.4 不同激素配比对愈伤组织诱导及再分化的影响
  • 2.4 结论与讨论
  • 2.4.1 冷处理对带鳞茎盘的鳞片诱导试管球的影响
  • 2.4.2 头孢拉定溶液对鳞茎盘消毒处理的影响
  • 2.4.3 激素对带鳞茎盘的鳞片诱导试管球的影响
  • 2.4.4 激素对鳞片诱导愈伤组织和再分化的影响
  • 2.4.5 冷处理时间、鳞片位置对鳞片愈伤组织诱导和再分化的影响
  • 2.4.6 外植体类型对试管球诱导的影响
  • 第三章 崇明水仙试管球高频增殖技术体系的建立
  • 3.1 材料
  • 3.2 方法
  • 3.2.1 激素配比试验
  • 3.2.2 蔗糖浓度试验
  • 3.2.3 活性炭浓度试验
  • 3.2.4 试管球生根试验
  • 3.2.5 炼苗移栽
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 不同激素配比对增殖的影响
  • 3.3.2 不同蔗糖浓度对增殖的影响
  • 3.3.3 不同活性炭（AC）浓度对增殖的影响
  • 3.3.4 不同 NAA 浓度对生根的影响
  • 3.3.5 栽培条件对试管球移栽成活率的影响
  • 3.4 结论与讨论
  • 3.4.1 激素对增殖的影响
  • 3.4.2 蔗糖对增殖的影响
  • 3.4.3 活性炭（AC）对增殖的影响
  • 3.4.4 活性碳（AC）对生根的影响
  • 第四章 崇明水仙离体脱毒技术体系的建立
  • 4.1 材料及试剂
  • 4.1.1 材料
  • 4.1.2 仪器和设备
  • 4.1.3 主要试剂
  • 4.2 方法
  • 4.2.1 热处理＋DHT 处理脱除病毒
  • 4.2.2 DHT＋病毒唑处理脱除病毒
  • 4.2.3 脱毒苗的病毒检测
  • 4.3 结果与分析
  • 4.3.1 热处理＋DHT 处理的脱毒结果
  • 4.3.2 DHT＋病毒唑处理的脱毒结果
  • 4.4 结论与讨论
  • 4.4.1 病毒唑对病毒的脱除作用
  • 4.4.2 DHT 对病毒的脱除作用
  • 4.4.3 热处理＋DHT 处理脱除崇明水仙病毒的效果
  • 4.4.4 DHT+病毒唑培养脱除崇明水仙病毒的效果
  • 4.4.5 其他脱毒途径的探索
  • 总结论
  • 图版说明
  • 参考文献
  • 图版Ⅰ试管球诱导
  • 图版Ⅱ试管球增殖、生根、移栽
  • 图版Ⅲ崇明水仙病毒病症状及脱毒处理效果
  • 详细摘要

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