PLGA/I型胶原/壳聚糖复合人工硬脊膜的研制及其相关研究

论文摘要

目的应用生物相容性良好材料聚乳酸/乙醇酸共聚物（PLGA）、I型胶原和壳聚糖,研制出新型的复合生物硬脊膜作为理想的硬脊膜修复材料。方法应用分子量为5万的PLGA共聚物使用溶剂浇铸/粒子浸出法制作出多孔PLGA支架（P膜）,然后在多孔PLGA支架的表面层复合9:1和5:5比例的I型胶原和壳聚糖材料,分别制作出PGC（5:5）膜和PGC（9:1）膜,然后在PGC（9:1）膜按100u/cm2加入bFGF制成bPGC（9:1）膜。进行材料的吸水率、接触角、孔隙率、力学性能、扫描电镜、细胞毒性实验及细胞增殖实验检测。并从中选择出力学性能满意和生物相容性佳的材料的PGC（9:1）和bPGC（9:1）膜备用。设计出硬脊膜损伤修复动物模型,并用PGC（9:1）膜、bPGC（9:1）膜及自体筋膜修复硬脊膜。术后1、2、4和16周随机处死取材,肉眼、光镜HE染色检测、透射电镜检测及I型胶原、bFGF和IL-6的免疫组织化学检测,观察疤痕组织修复、材料与脊髓组织粘连、炎性细胞浸润及I型胶原、bFGF和IL-6表达情况。结果PGC膜及bPGC膜力学性能及生物相容性优于PLGA膜。在动物实验中应用非缝合技术,PGC（9:1）和bPGC膜（9:1）成功地修复了硬脊膜缺损。两种合成修复膜较自体筋膜的炎性反应较明显,但与脊髓组织粘连较后者轻,P＜0.05。与其它两种材料相比,PGC膜抑制了I型胶原蛋白的表达,而bPGC（9:1）与自体筋膜组差异无统计学意义。bPGC（9:1）材料中的bFGF在1—2周内均有表达,4周时未见表达。结论通过I型胶原、壳聚糖改性的多孔PLGA材料,可以改变材料的力学性能及生物相容性,其中PGC（9:1）和bPGC（9:1）材料的性能较佳。PGC材料植入机体后,组织的炎性反应较自体筋膜明显,但亦可以达到满意的修复硬脊膜的效果。PGC材料中加入适量的bFGF,可以促进成纤维细胞的增殖与分化,促进硬脊膜组织的修复替代。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 英文缩略语表
• 详细摘要
• 前言
• 第一部分 人工硬脊膜PLGA系列膜的研制
• 材料与仪器
• 一、材料
• 二、主要仪器设备
• 方法
• 一、Ⅰ型胶原、壳聚糖及bFGF溶液的配制
• 二、多孔PLGA膜（P膜）的制作
• 三、PLGA/Ⅰ型胶原复合膜的制作（PG膜）
• 四、PLGA/Ⅰ型胶原/壳聚糖膜（9:1）的制作（PGC9:1膜）
• 五、PLGA/Ⅰ型胶原/壳聚糖膜（5:5）的制作（PGC5:5膜）
• 六、bFGF/PLGA/Ⅰ型胶原/壳聚糖膜的制作（bPGC9:1膜）
• 结果
• 一、系列膜肉眼观察
• 二、实验材料图片
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 PLGA/Ⅰ型胶原/壳聚糖复合膜的物理性能及生物相容性的检测
• 材料与仪器
• 一、药品与试剂
• 二、主要仪器设备
• 方法
• 一、材料吸水率的测定
• 二、材料的力学性能的测试
• 三、接触角测定
• 四、孔隙率检测
• 五、细胞毒性实验
• 六、扫描电镜
• 结果
• 一、材料的吸水率
• 二、力学性能测定
• 1 抗拉强度结果
• 2 伸长率统计结果
• 三、接触角测定
• 四、孔隙率检测
• 五、细胞毒性试验结果
• 1 细胞形态学观察
• 2 各组MTT检测
• 3 成纤维细胞增殖率检测
• 六、扫描电镜（Scanning Electron Microscope,SEM）
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第三部分 硬脊膜损伤修复动物模型的构建
• 材料
• 方法
• 一、实验分组
• 二、硬脊膜损伤修复模型手术操作步骤
• 结果
• 1、手术并发症统计
• 2、不同膜修复时间及一次成功率比较的比较
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第四部分 系列膜的病理学及透射电镜研究
• 材料与仪器
• 方法
• 一、标本的采集及肉眼观察指标
• 二、光镜检查（HE染色）
• 三、透射电境观察（transmission electron microscope,TEM）
• 四、免疫组织化学检查（immunohistochemistry）
• 五、统计学处理
• 结果
• 一、肉眼观察
• 二、光镜下HE染色结果
• 三、免疫组织化学检查结果
• 四、透射电镜观察（transmission electron microscope,TEM）
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 查新结论