硫酸雌酮多克隆和单克隆抗体的制备及鉴定

论文摘要

硫酸雌酮（estrone-3-sulfate）简称E1S,是一种雌激素的衍生物,目前广泛的应用于畜牧生产上,进行家畜的早期妊娠诊断。本实验合成了硫酸雌酮全抗原物质；制备了硫酸雌酮的多克隆抗体和单克隆抗体,并进行了鉴定。主要内容如下：1)硫酸雌酮抗原物质的制备通过雌酮硫酸钠合成了硫酸雌酮半抗原物质并进行了质谱鉴定,将获得的半抗原物质与BSA和OVA通过碳二亚胺法进行偶联,获得了免疫原硫酸雌酮-BSA浓度为9.29mg/ml和包被原硫酸雌酮-OVA浓度为4.68mg/ml,测定了硫酸雌酮-BSA和硫酸雌酮-OVA的偶联比分别为20.4：1和15.2：1,使用紫外方法和SDS-PAGE电泳方法进行了全抗原物质的鉴定,证明全部偶联成功。2)硫酸雌酮多克隆抗体的制备用偶联成功的全抗原物质对实验兔进行了免疫,确定了间接ELISA法的最佳反应条件,确定出抗原的最佳工作浓度为8000,甲兔的最佳工作浓度为81000,乙兔的最佳工作浓度为27000。将获得的多克隆抗体使用硫酸铵盐析法进行了纯化,通过电泳证明纯化后纯度得到明显提高。3)硫酸雌酮单克隆抗体的制备确定了小鼠ELISA反应最佳条件,血清的最佳稀释倍数为1000,包被原的最佳包被浓度为6ug/ml。筛选出了血清中抗体特异性较好的小鼠,8#作为融合首选,1#和10#作为备用。纯化获得单抗腹水,并通过SDS-PAGE电泳验证纯化纯度得到明显提高。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.硫酸雌酮的研究现状
• 1.1.硫酸雌酮
• 1.2.硫酸雌酮在各种家畜体内的代谢水平
• 1.3.硫酸雌酮检测方法
• 1.4.硫酸雌酮的应用
• 1.5.硫酸雌酮的应用前景
• 2.单克隆抗体
• 2.1.单克隆抗体的历史
• 2.2.单克隆抗体的原理
• 2.3.单克隆抗体的主要技术内容
• 2.4.单克隆抗体的应用
• 3.研究目的和意义
• 第二章 硫酸雌酮抗原的制备及鉴定
• 1.材料与方法
• 1.1.材料
• 1.2.方法
• 2.结果与分析
• 2.1.半抗原的质谱鉴定
• 2.2.全抗原的紫外鉴定
• 2.3.全抗原的电泳鉴定
• 3.讨论
• 4.小结
• 第三章 硫酸雌酮多克隆抗体制备及鉴定
• 1.材料与方法
• 1.1.材料
• 1.2.方法
• 2.结果与分析
• 2.1.实验兔抗体最适浓度和血清效价结果
• 2.2.实验兔抗体特异性结果
• 2.3.多克隆抗体电泳鉴定结果
• 3.讨论
• 4.小结
• 第四章 硫酸雌酮单克隆抗体制备及鉴定
• 1.材料与方法
• 1.1.材料
• 1.2.方法
• 2.结果与分析
• 2.1.小鼠抗体最适浓度和血清效价结果
• 2.2.小鼠抗体特异性检测结果
• 2.3.杂交瘤细胞制备及筛选结果
• 2.4.单克隆抗体鉴定结果
• 3.讨论
• 3.1.杂交瘤细胞的筛选
• 3.2.单克隆抗体的制备与纯化
• 4.小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表论文