本文主要研究内容
作者李先斌（2019）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp12抑制I型干扰素表达作用机理的研究》一文中研究指出：猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是一种易于发生变异和重组的RNA病毒,PRRSV感染后可造成持续性感染和免疫抑制,对养猪业危害极为严重。天然免疫反应是宿主抗病毒感染的重要方式,PRRSV能够利用其编码蛋白拮抗宿主天然免疫应答,逃避宿主免疫监测。Nsp12是PRRSV复制相关的非结构蛋白,其是否参与拮抗宿主天然免疫反应尚未解析,本研究重点围绕HP-PRRSV HuN4株Nsp12在抑制I型IFN信号通路中的作用机理展开研究。在实验室前期研究发现HuN4株Nsp12能够抑制IFN-I表达的基础上,为了探究Nsp12抑制IFN-I表达的分子途径,本研究利用双荧光素酶报告系统、荧光定量PCR等分析了HuN4株Nsp12对IFN-β转录启动活性的影响,结果显示,HuN4株Nsp12能够抑制IFN-β的转录和启动子活性,而且这种抑制作用呈明显的剂量依赖性。HP-PRRSV与经典毒株Nsp12存在4个氨基酸差异,但这些差异氨基酸均不影响Nsp12抑制IFN-β启动子的活性。将Nsp12经过系列截短后分析其抑制IFN-I表达的主要功能域,结果显示Nsp12抑制IFN-I表达的主要区域位于其N端结构域。为了确定Nsp12抑制IFN-β的信号通路,我们检测了Nsp12对RIG-I信号通路和TLR3通路的影响,结果显示,Nsp12对RIG-I及其接头蛋白MAVS诱导的IFN-β产生了明显的抑制作用,但对TRIF刺激的IFN-β产生没有抑制作用,表明Nsp12是通过RIG-I信号通路抑制IFN-β表达,而非TLR3信号通路。由于IFN-β的表达可受转录因子IRF3和NF-κB的调节,我们检测了Nsp12对IRF3和NF-κB结合域的启动子活性,结果显示,Nsp12能够抑制转录因子NF-κB结合域的启动子活性。而且Nsp12还可以抑制由TNF-α刺激引起的p65蛋白核迁移。以上研究结果证实HP-PRRSV HuN4株Nsp12能够通过NF-κB的激活途径抑制IFN-β的表达。为了继续探究Nsp12蛋白的功能,我们将前期通过酵母双杂交筛选出的与Nsp12互作的宿主细胞蛋白半乳糖凝集素3（LGALS3）,利用免疫共沉淀和激光共聚焦试验进行鉴定,结果证实Nsp12和LGALS3存在相互作用,并确定了LGALS3与Nsp12相互作用的区域位于LGALS3（125aa-166aa）。将LGALS3过表达后,可使HuN4株在Marc-145细胞中的增殖受到明显抑制,而在LGALS3缺失细胞系Marc-145ΔLGALS3中则可促进HuN4株的增殖。有趣的是,我们发现在Marc-145细胞中LGALS3过表达不仅能够抑制IFN-β的启动子活性,而且可以抑制RIG-I诱导的IFN-β产生,同时还能够抑制转录因子NF-κB结合域的启动子活性。在Marc-145ΔLGALS3缺失细胞系中,由poly（I:C）刺激诱导的IFN-β启动子活性明显强于正常的Marc-145细胞;Nsp12虽然在两种细胞系中均能抑制IFN-β启动子的活性,但其在Marc-145ΔLGALS3缺失细胞系中的抑制程度明显弱于正常Marc-145细胞。上述研究表明,互作蛋白LGALS3可能在Nsp12抑制IFN-β表达的过程中发挥了协同作用,但Nsp12抑制IFN-β表达并非完全依赖于互作蛋白LGALS3。综上所述,本研究证实了PRRSV Nsp12能够通过RIG-I/NF-κB通路抑制IFN-I的表达,其互作蛋白LGALS3也能够协助Nsp12通过RIG-I/NF-κB通路发挥抑制作用,为阐明PRRSV免疫抑制机理提供了新的理论依据。
Abstract
zhu fan shi yu hu xi zeng ge zheng bing du （Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）shi yi chong yi yu fa sheng bian yi he chong zu de RNAbing du ,PRRSVgan ran hou ke zao cheng chi xu xing gan ran he mian yi yi zhi ,dui yang zhu ye wei hai ji wei yan chong 。tian ran mian yi fan ying shi su zhu kang bing du gan ran de chong yao fang shi ,PRRSVneng gou li yong ji bian ma dan bai jie kang su zhu tian ran mian yi ying da ,tao bi su zhu mian yi jian ce 。Nsp12shi PRRSVfu zhi xiang guan de fei jie gou dan bai ,ji shi fou can yu jie kang su zhu tian ran mian yi fan ying shang wei jie xi ,ben yan jiu chong dian wei rao HP-PRRSV HuN4zhu Nsp12zai yi zhi Ixing IFNxin hao tong lu zhong de zuo yong ji li zhan kai yan jiu 。zai shi yan shi qian ji yan jiu fa xian HuN4zhu Nsp12neng gou yi zhi IFN-Ibiao da de ji chu shang ,wei le tan jiu Nsp12yi zhi IFN-Ibiao da de fen zi tu jing ,ben yan jiu li yong shuang ying guang su mei bao gao ji tong 、ying guang ding liang PCRdeng fen xi le HuN4zhu Nsp12dui IFN-βzhuai lu qi dong huo xing de ying xiang ,jie guo xian shi ,HuN4zhu Nsp12neng gou yi zhi IFN-βde zhuai lu he qi dong zi huo xing ,er ju zhe chong yi zhi zuo yong cheng ming xian de ji liang yi lai xing 。HP-PRRSVyu jing dian du zhu Nsp12cun zai 4ge an ji suan cha yi ,dan zhe xie cha yi an ji suan jun bu ying xiang Nsp12yi zhi IFN-βqi dong zi de huo xing 。jiang Nsp12jing guo ji lie jie duan hou fen xi ji yi zhi IFN-Ibiao da de zhu yao gong neng yu ,jie guo xian shi Nsp12yi zhi IFN-Ibiao da de zhu yao ou yu wei yu ji Nduan jie gou yu 。wei le que ding Nsp12yi zhi IFN-βde xin hao tong lu ,wo men jian ce le Nsp12dui RIG-Ixin hao tong lu he TLR3tong lu de ying xiang ,jie guo xian shi ,Nsp12dui RIG-Iji ji jie tou dan bai MAVSyou dao de IFN-βchan sheng le ming xian de yi zhi zuo yong ,dan dui TRIFci ji de IFN-βchan sheng mei you yi zhi zuo yong ,biao ming Nsp12shi tong guo RIG-Ixin hao tong lu yi zhi IFN-βbiao da ,er fei TLR3xin hao tong lu 。you yu IFN-βde biao da ke shou zhuai lu yin zi IRF3he NF-κBde diao jie ,wo men jian ce le Nsp12dui IRF3he NF-κBjie ge yu de qi dong zi huo xing ,jie guo xian shi ,Nsp12neng gou yi zhi zhuai lu yin zi NF-κBjie ge yu de qi dong zi huo xing 。er ju Nsp12hai ke yi yi zhi you TNF-αci ji yin qi de p65dan bai he qian yi 。yi shang yan jiu jie guo zheng shi HP-PRRSV HuN4zhu Nsp12neng gou tong guo NF-κBde ji huo tu jing yi zhi IFN-βde biao da 。wei le ji xu tan jiu Nsp12dan bai de gong neng ,wo men jiang qian ji tong guo jiao mu shuang za jiao shai shua chu de yu Nsp12hu zuo de su zhu xi bao dan bai ban ru tang ning ji su 3（LGALS3）,li yong mian yi gong chen dian he ji guang gong ju jiao shi yan jin hang jian ding ,jie guo zheng shi Nsp12he LGALS3cun zai xiang hu zuo yong ,bing que ding le LGALS3yu Nsp12xiang hu zuo yong de ou yu wei yu LGALS3（125aa-166aa）。jiang LGALS3guo biao da hou ,ke shi HuN4zhu zai Marc-145xi bao zhong de zeng shi shou dao ming xian yi zhi ,er zai LGALS3que shi xi bao ji Marc-145ΔLGALS3zhong ze ke cu jin HuN4zhu de zeng shi 。you qu de shi ,wo men fa xian zai Marc-145xi bao zhong LGALS3guo biao da bu jin neng gou yi zhi IFN-βde qi dong zi huo xing ,er ju ke yi yi zhi RIG-Iyou dao de IFN-βchan sheng ,tong shi hai neng gou yi zhi zhuai lu yin zi NF-κBjie ge yu de qi dong zi huo xing 。zai Marc-145ΔLGALS3que shi xi bao ji zhong ,you poly（I:C）ci ji you dao de IFN-βqi dong zi huo xing ming xian jiang yu zheng chang de Marc-145xi bao ;Nsp12sui ran zai liang chong xi bao ji zhong jun neng yi zhi IFN-βqi dong zi de huo xing ,dan ji zai Marc-145ΔLGALS3que shi xi bao ji zhong de yi zhi cheng du ming xian ruo yu zheng chang Marc-145xi bao 。shang shu yan jiu biao ming ,hu zuo dan bai LGALS3ke neng zai Nsp12yi zhi IFN-βbiao da de guo cheng zhong fa hui le xie tong zuo yong ,dan Nsp12yi zhi IFN-βbiao da bing fei wan quan yi lai yu hu zuo dan bai LGALS3。zeng shang suo shu ,ben yan jiu zheng shi le PRRSV Nsp12neng gou tong guo RIG-I/NF-κBtong lu yi zhi IFN-Ide biao da ,ji hu zuo dan bai LGALS3ye neng gou xie zhu Nsp12tong guo RIG-I/NF-κBtong lu fa hui yi zhi zuo yong ,wei chan ming PRRSVmian yi yi zhi ji li di gong le xin de li lun yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的李先斌，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于猪繁殖与呼吸综合征病毒论文,半乳糖凝集素论文,型干扰素论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。