论文摘要
痢疾杆菌在30℃时不具有侵袭力,37℃时毒力明显增强,已有的研究表明这种依赖于温度的毒力基因的表达受H-NS蛋白的调控。H-NS是一种重要的类核相关蛋白,在革兰氏阴性菌中普遍存在,能够调控大量基因的表达。对其研究有助于加深人们对痢疾杆菌致病机理的认识,为预防和控制该病的发生提供更多的手段和途径。 为了更深入的了解hns基因在细菌生命活动中所起的作用,我们首先利用RecA重组系统构建了痢疾杆菌2457T hns基因的插入突变体;随后,对基于Red重组系统的痢疾杆菌2457T缺失突变体的构建方法进行了摸索并成功地敲除了hns、hdeA、hdeB、yhiE和yhiF 5个基因,研究表明延长同源臂的长度可以明显提高同源重组的效率,缩短构建缺失突变体所需的时间。对野生株和2457T△hns的生长曲线和侵袭能力进行的研究表明:与野生株相比,突变体的生长速度变缓,侵袭Hela细胞能力减弱。 利用双向电泳技术对2457T和2457T△hns在不同的培养基和生长阶段的蛋白表达谱进行了比较,发现了113个表达差异的蛋白点,经质谱鉴定出的有84个,对应89个基因。其中47个基因表达上调,42个基因表达下调。这些表达差异的基因不但与氨基酸合成、中间产物及能量代谢有关,而且还与痢疾杆菌对环境变化的适应紧密相连,表明H-NS对基因的表达具有全局性的调控作用。比较特别的是,6个参与组氨酸合成与代谢的基因hisJ、hisG、hisF、hisH、hisB以及hisD在突变体表达下调,而与铁代谢有关的5个基因fur、ftn、dps、yecI和bcp的表达明显上调。另外,在hns基因突变体中,发现它的另外一个共生同源基因sfh表达明显上调,而不是通常认为的stpA。这些结果加深了我们对痢疾杆菌中H-NS蛋白的认识,有助于痢疾杆菌致病机理的研究。
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