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酶联免疫法检测双酚A的研究

2020-12-06阅读(773)

酶联免疫法检测双酚A的研究

论文摘要

双酚A（Bisphenol A, BPA）,是近几年从食品塑料包装材料中新发现的一种“内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals, ECD）”,具有某些雌激素特性。无论在食品包装材料,还是在环境中,其含量都很低,用常规HPLC方法无法快速分析。本论文旨在研究快速检测双酚A的酶联免疫法（ELISA）,这对食品安全监督以及技术储备有着重要的意义。本文首先采用重氮化法在BPA分子上引入羧基,接着将其与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin, BSA）和卵清白蛋白（Ovalbumin, OVA）偶联,制备免疫抗原BPAH-BSA和包被抗原BPAH-OVA。其紫外扫描光谱和红外光谱表明偶联成功。通过紫外分光光度法估算BPAH-BSA和BPAH-OVA的偶联比分别为12.2和13.2。用免疫抗原BPAH-BSA免疫新西兰白兔制备抗血清,产生的抗血清效价最高达到51200。然后以此抗体为基础设计了间接竞争ELISA法,检测限达到0.001μg·mL-1, 50 %抑制率（50 % inhibitory concentration, IC50）为10μg·mL-1。用双酚酸、双酚B、双酚E、4-枯基苯酚试验了此方法的特异性,交叉反应率分别为20.0 %、10.0 %、3.3 %和2.0 %。重现性实验的变异系数范围为4.07～9.95 %,CV %值均小于10%,重复性良好。对聚碳酸酯（PC）材料的桶装纯净水作了1μg·mL-1、3μg·mL-1、10μg·mL-1、25μg·mL-1和50μg·mL-1水平的添加回收实验,五个水平的回收率范围为92.5～107.7 %。综合各因素,本论文研究的ELISA法各项参数都达到了检测的需要,具有实际应用价值。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 1.1 双酚A 理化性质及危害研究
  • 1.1.1 双酚A 理化性质
  • 1.1.2 双酚A 毒性研究
  • 1.1.3 双酚A 在人体中残留的途径
  • 1.1.4 双酚A 的限量标准
  • 1.2 仪器分析技术
  • 1.2.1 样品预处理方法
  • 1.2.2 色谱法
  • 1.2.3 色谱质谱联用
  • 1.2.4 示波极谱法
  • 1.3 免疫化学分析技术
  • 1.3.1 免疫化学分析的理论基础
  • 1.3.2 酶免疫测定法
  • 1.3.3 酶联免疫吸附测定法
  • 1.4 本课题研究的目标和内容
  • 1.4.1 研究目标
  • 1.4.2 研究内容
  • 第二章 双酚A 完全抗原的制备与鉴定
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 试剂
  • 2.1.2 主要溶液
  • 2.1.3 主要仪器设备
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 双酚A 半抗原的制备
  • 2.2.2 双酚A 完全抗原的制备
  • 2.2.3 双酚A 包被抗原的制备
  • 2.2.4 完全抗原与包被抗原的鉴定
  • 2.2.5 完全抗原与包被抗原偶联比的估测
  • 2.3 结果与分析
  • 2.3.1 完全抗原的紫外扫描
  • 2.3.2 半抗原以及完全抗原的红外光谱
  • 2.3.4 完全抗原偶联比的估测
  • 2.4 讨论
  • 2.4.1 间隔臂的选择
  • 2.4.2 载体的选择
  • 2.4.3 偶联方法的选择
  • 2.4.4 最佳偶联比
  • 2.5 本章小结
  • 第三章 抗双酚A 抗体的制备与鉴定
  • 3.1 实验材料
  • 3.1.1 材料和试剂
  • 3.1.2 主要溶液
  • 3.1.3 仪器设备
  • 3.2 实验方法
  • 3.2.1 抗血清的制备
  • 3.2.2 抗血清的收获及分离纯化
  • 3.2.3 抗双酚A 抗体效价的测定
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 抗血清的制备
  • 3.3.2 抗血清的收获及分离纯化
  • 3.3.3 抗双酚A 抗体效价的测定
  • 3.4 讨论
  • 3.4.1 免疫动物的选择
  • 3.4.2 动物免疫过程
  • 3.5 本章小结
  • 第四章 ELISA 检测方法的建立
  • 4.1 实验材料
  • 4.1.1 试剂
  • 4.1.2 主要溶液
  • 4.1.3 仪器设备
  • 4.2 实验方法
  • 4.2.1 包被抗原及抗体稀释度的确定
  • 4.2.2 竞争ELISA 标准曲线的制作
  • 4.2.3 半数抑制浓度IC50 和最低检出限的测定
  • 4.2.4 重现性实验
  • 4.2.5 特异性实验
  • 4.2.6 回收实验
  • 4.2.7 高效液相色谱（HPLC）法
  • 4.2.8 ELISA 法与HPLC 法的比较
  • 4.3 结果与分析
  • 4.3.1 包被抗原及抗体稀释度的确定
  • 4.3.2 竞争ELISA 标准曲线的制作
  • 4.3.3 抑制浓度IC50 和最低检测限的测定
  • 4.3.4 重现性实验
  • 4.3.5 特异性实验
  • 4.2.6 回收实验
  • 4.3.7 高效液相色谱（HPLC）法
  • 4.3.8 ELISA 法与HPLC 法的比较
  • 4.4 讨论
  • 4.4.1 ELISA 方法的影响因素
  • 4.4.2 ELISA 方法的评估
  • 4.4.3 高效液相色谱（HPLC）法
  • 4.4.4 ELISA 法与HPLC 法的比较
  • 4.5 本章小结
  • 主要结论
  • 问题与展望
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录A
  • 附录B

    • 相关论文文献

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