高盐极端生境下放线菌的生态分布及拮抗性放线菌资源研究

论文摘要

本文以不同高盐极端生境的盐湖和盐渍土为研究对象,探讨了不同因素对嗜盐、耐盐放线菌分离效果的影响,及不同生境下放线菌的生态分布规律;并以农业生产上危害较为严重的4种畜牧养殖业中的动物病原菌为靶标菌进行优良拮抗放线菌筛选及发酵条件优化;采用多相分类技术从表型、基因型及系统发育三个不同层次对部分特殊的和优良拮抗放线菌菌株进行鉴定。得出以下主要结论:1.初步建立了青海察尔汗盐湖放线菌的分离方法试验证明改良淀粉酪素培养基的分离效果较好,不仅分离到的放线菌数量最多,且获得的种类也最多;原生矿盐可以分离更多的放线菌数量,分离获得的放线菌嗜盐耐盐度高,在30 %高浓度下也能够分离得到放线菌;不同样品预处理中,处理9(120 W、2450 Hz微波处理样品3min,加入酪蛋白水解物(CA ) 10 g/kg及腐殖酸(HA ) 20 g/kg,40℃振荡20 min)效果最好,可提高供试样品放线菌出菌率935.46倍,比未处理样多分出13种新的放线菌,并且无其他杂菌生长。2.揭示了青海察尔汗盐湖与西藏甘肃部分盐渍土放线菌区系构成从西藏色林错湖和甘肃酒泉金塔县的土样中,分别用高氏1号琼脂培养基、腐殖酸培养基和精氨酸甘油琼脂培养基中共分离得到了211株放线菌。不同样品放线菌的区系构成具有一定差异,西藏样品中的放线菌类群数较多,以白孢类群和烬灰类群为主;甘肃样品中类群数较少,以黄色类群和白孢类群为主。从青海察尔汗盐湖特殊的盐环境下分离出27株不同类群的嗜盐及耐盐放线菌,其中嗜盐放线菌全部为中等及极端嗜盐,且嗜盐放线菌最适盐浓度最高可达30 %。3.明确了青海察尔汗盐湖嗜盐耐盐放线菌对不同盐分的嗜盐耐盐程度对分离自青海察尔汗盐湖不同类群的27株放线菌选用原生矿盐、NaCl、KCl分别进行耐盐及嗜盐放线菌的划分,结果表明27株放线菌对不同盐类型的嗜盐、耐盐程度显著不同。对于原生矿盐的耐受性,6株菌可在含盐30 %的培养液中生长,占供试菌株的31.58 %。对于KCl的耐受性,有5株菌可在含盐30 %的培养液中生长,占供试菌株的26.32 %,其中1株最适生长盐浓度即为30 %。对于NaCl的耐受性,只有1株菌可在含盐30%的培养液中生长,在高于15 %盐浓度的培养液中放线菌生长均较弱。按照目前国际上通用的NaCl划分,7株嗜盐放线菌全部为中等嗜盐菌;如果以KCl划分,有6株极端嗜盐放线菌;而如果用原生矿盐划分,有7株嗜盐放线菌为极端嗜盐放线菌。另外,获得1株极端嗜K型放线菌。4.筛选出了14株抗动物病原菌优良拮抗放线菌从供试盐渍土及盐湖中分离出的370株放线菌中34.05%具有拮抗活性,具有广谱性拮抗放线菌14株,占3.78%;其中对鸡大肠埃希菌和牛无乳链球菌的拮抗效果明显优于猪大肠埃希菌和猪金黄色葡萄球菌。5.优化了16号放线菌的发酵条件筛选出的抗牛无乳链球菌的16号优良拮抗放线菌的最佳发酵条件:接种量10 %、温度25℃、装液量150 mL、初始pH 7时将种龄为36 h发酵84h发酵液的抑菌活性为最大,抑菌圈直径由初始的25 mm增加为38 mm,增幅为52 %。6.确定了17株形态生理特殊和优良拮抗放线菌的分类地位采用多相分类技术对17株形态生理特殊和优良拮抗放线菌从形态学、生理生化特征、细胞化学、以及16S rDNA序列进行分析,并确定了其分类地位。其中菌株3C、201Y、211Y共3株放线菌为潜在新种。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 我国高盐极端环境的分布及高盐环境中放线菌研究概况
• 1.1.1 我国盐渍土的分布
• 1.1.2 我国盐湖的分布
• 1.1.3 高盐环境中拮抗放线菌资源研究进展
• 1.2 嗜盐耐盐放线菌的分离方法研究进展
• 1.3 放线菌分类学研究
• 1.3.1 嗜盐耐盐放线菌分类系统及发展
• 1.3.2 放线菌的多相分类研究方法
• 1.3.3 放线菌分类学发展趋势
• 1.4 放线菌产抗生素研究概况
• 1.4.1 抗生素广泛应用于畜禽养殖业中
• 1.4.2 筛选抗生素的方法
• 1.4.3 从极端环境中筛选新抗生素
• 1.5 论文设计思路
• 1.5.1 研究的目的意义
• 1.5.2 技术路线
• 1.5.3 预期结果
• 第二章 青海察尔汗盐湖放线菌分离方法研究
• 2.1 材料及方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 添加不同盐种类和盐分含量对放线菌分离效果的影响
• 2.2.2 添加不同盐种类和盐分含量对放线菌分离效果的影响
• 2.2.3 不同分离培养基对放线菌分离效果的影响
• 2.2.4 不同预处理对嗜盐耐盐放线菌出菌率的影响
• 2.3 结论与讨论
• 第三章 青海察尔汗盐湖与西藏甘肃部分盐渍土放线菌区系分布
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 样品水溶性总盐及pH
• 3.2.2 西藏甘肃盐渍土中放线菌区系
• 3.2.3 青海察尔汗盐湖嗜盐及耐盐放线菌的划分
• 3.3 结论与讨论
• 第四章 优良拮抗放线菌的筛选及发酵条件研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 供试放线菌的拮抗性试验
• 4.2.2 发酵滤液拮抗性试验
• 4.2.3 16 号拮抗放线菌液体发酵条件优化
• 4.3 结论与讨论
• 第五章 优良拮抗放线菌及形态、生理学特殊菌株的多相分类
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 形态和培养特征
• 5.2.2 生理生化特征
• 5.2.3 药敏性试验
• 5.2.4 生态条件试验
• 5.2.5 细胞壁化学组分分析
• 5.2.6 16S rDNA 序列分析
• 5.3 结论与讨论
• 第六章 结论
• 6.1 结论
• 6.1.1 青海察尔汗盐湖放线菌的分离方法研究
• 6.1.2 青海察尔汗盐湖与西藏甘肃部分盐渍土区系研究
• 6.1.3 青海察尔汗盐湖嗜盐耐盐放线菌的划分
• 6.1.4 优良拮抗放线菌及抗菌谱
• 6.1.5 16 号放线菌的发酵条件研究
• 6.1.6 供试菌株的多相分类
• 6.2 讨论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简介