肝细胞生长因子及其受体在人卵巢癌细胞中的表达与作用研究

论文摘要

肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor.HGF）是一种多肽生长因子,首先从部分肝脏切除大鼠的血清中提取。由于其对肝细胞具有强的丝裂原作用.因此命名为肝细胞生长因子。最初它仅仅被认为是肝细胞增殖的丝裂原之一[1] ,以后逐渐发现其具有促进肿瘤进展的多种功能,HGF生物学活性是由原癌基因c-met编码的跨膜受体蛋白所介导,对卵巢癌等多种肿瘤的失控性生长发挥重要的作用[2]。HGF与c-met结合后,受体发生自身磷酸化,由此激活受体的内在酪氨酸激酶活性,进而引起细胞内一系列信号转导途径的级联激活,从而调节细胞的增殖、分化、运动和血管生成等。卵巢恶性肿瘤细胞中HGF/c- met的表达与MVD指数密切相关,提示可能由于细胞HGF/c- met蛋白异常高表达,导致其对HGF敏感性增强,从而促使该细胞过度增殖、分化乃至恶化[3]。HGF是一种血管生成的强大诱导剂,可诱发内皮细胞增殖和迁移,刺激体内新血管的生成。因此,本课题旨在通过研究HGF及其受体在卵巢癌细胞中的表达,揭示HGF及其受体在卵巢癌等多种肿瘤的失控性生长及其转移过程中发挥的重要作用,并进一步探讨抗卵巢癌药物紫杉醇对HGF/c- met信号传导通路的调控。目的:1.明确HGF及其受体c- met基因及其蛋白在卵巢癌中的表达规律。2.明确HGF与c-met在卵巢癌中表达的相关关系。3.明确HGF/c-met在卵巢癌细胞侵袭转移过程中的作用。4.探讨抗卵巢癌药物紫杉醇对HGF/c- met表达及作用的影响。方法:1.免疫组化检测HGF/c-met蛋白在人卵巢癌组织中的表达水平。2. RT—PCR,原位杂交技术检测体外培养的人卵巢癌细胞中HGF/c-met基因的表达水平。3.Transwell侵袭小室检测HGF/c-met对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。4.MTT法、扫描电镜分析紫杉醇干预后对人卵巢癌细胞生长的影响。结果:1.卵巢肿瘤组织中存在HGF/c-met蛋白的高水平表达,二者与卵巢癌的发生、侵袭和转移密切相关。2.体外培养的人卵巢癌细胞系H0-8910中存在HGF mRNA及c-metmRNA表达,一定浓度的HGF可以上调c-met的表达。3. Transwell小室培养24小时后用fibronectin将穿透的细胞粘在膜的反面,染色后显微镜下人工计数,发现HGF/c-met诱导组的细胞侵袭能力明显增强。4.扫描电镜下观察,发现HGF/c-met在细胞核细胞膜均表达强烈.但是在另一组加入一定工作浓度的紫衫醇后发现抑制其表达,显示图象所需激发电压也增高。结论:1.体外培养的卵巢癌肿瘤细胞和人的卵巢肿瘤组织中均存在着HGF/c-met的明显表达,而且呈相关关系。2.HGF/c-met基因及其蛋白表达,使人卵巢癌细胞的侵袭能力明显增强。3.抑制HGF/c-met基因及其蛋白的表达,是紫杉醇对卵巢肿瘤细胞抑制杀伤作用的重要途径之一。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 文献回顾
• 正文
• 实验一:HGF /c-met 蛋白及其m RNA 的表达水平
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 标本与细胞
• 1.1.2 预处理
• 1.1.3 染色主要工作液
• 1.1.4 探针
• 1.1.5 主要试剂，仪器，耗材
• 1.1.6 免疫组化
• 1.1.7 原位杂交
• 1.1.8 RT-PCR
• 1.2 结果判定标准
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 实验二紫杉醇对卵巢癌细胞侵袭能力的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 主要试剂，仪器，耗材
• 2.1.2 Transwell 侵袭小室
• 2.1.3 MTT
• 2.1.4 荧光双标
• 2.2 实验结果
• 2.3 讨论
• 小结
• 展望及不足
• 参考文献
• 个人简历
• 论文发表
• 致谢