膜联蛋白B1的功能研究及其在蛋白分离和纯化中的应用

论文题目: 膜联蛋白B1的功能研究及其在蛋白分离和纯化中的应用

论文类型: 博士论文

论文专业: 遗传学

作者: 高远舰

导师: 孙树汉

关键词: 膜联蛋白,囊尾蚴,纯化,单克隆抗体,免疫组化,抗炎,纤维化,凋亡,融合载体,标签

文献来源: 第二军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 囊尾蚴引起的囊虫病对人畜的危害是很大的,且囊虫病的预防仍然是薄弱环节。囊尾蚴能够在人体中存活几年的时间,而在存活的囊尾蚴周围只有很轻微的炎症反应。这个现象表明存活的囊尾蚴可能通过某种机制维持了宿主和寄生虫之间的平衡。 Annexin B1是孙树汉等从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选得到的一个新基因,现有研究证实其属于annexin家族。Annexin蛋白家族是一群结构相似的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,广泛存在于动植物的各个组织器官,并且含量丰富。但人们对annexin的在体功能仍然所知甚少。Annexin B1是扁形动物门（platyhelminth）中首次被鉴定的一个annexin成员,研究它的生理功能,不仅可以了解annexin B1对于猪囊尾蚴的寄生、移行、生长、发育等生命活动中的重要意义,为治疗和预防该类疾病提供新的药物靶点,而且可以研究annexin在不同生物中的生理功能以及分子进化。本研究具体结果如下: 1.首先我们构建了annexin B1的非融合表达载体,在大肠杆菌中实现了高表达,利用膜联蛋白的钙依赖性磷脂结合活性,采用钙离子诱导的沉淀反应来纯化重组蛋白,建立了一种新的膜联蛋白纯化方法。 2.以制备的蛋白为抗原,采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以Elisa方法和有限稀释法进行3次筛选和克隆化,获得一株杂交瘤细胞株2B10H5,能稳定地分泌高滴度的针对annexin B1的特异单抗,为下一步功能研究打下了良好的基础。 3.采用常规H-E染色和免疫组化结合的方法,发现annexin B1主要位于囊尾蚴的体表,另外在炎性囊壁有不同程度的分布,炎细胞层和肌纤维母细胞呈特异性的阳性。提示annexin B1有可能作为一种分泌蛋白,被囊尾蚴阶段特异性地分泌,在寄生虫与宿主的相互作用中起着抗炎和抗纤维化的作用。 4.以annexin B1为融合标签构建表达载体,能够用来纯化重组蛋白。而且在标签和目的蛋白之间引入了蛋白内含肽,在合适的条件下诱发自切割,释放出完整的目的蛋白。该系统大大降低了蛋白纯化的工作量,简便快速,易于操作,成本低廉,处理量大,有可能对生物工程制品下游的中试和生产提供一定的帮助。

论文目录:

英文缩写

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分重组annexin B1的表达和纯化

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 Annexin B1单克隆抗体的制备和鉴定

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 Annexin B1的定位及功能分析

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第四部分 Annexin B1融合表达载体及纯化体系的建立

材料和方法

结果

讨论

参考文献

小结

综述

发表论文

致谢

发布时间: 2005-07-19

参考文献

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[6].大鼠TRPV4与膜联蛋白A2及微管蛋白β5相互作用研究[D]. 怀娟.山东大学2012
[7].一个新的膜联蛋白亚家族—AnxB1的鉴定及其抗凝血功能的研究[D]. 颜宏利.第二军医大学2002

膜联蛋白B1的功能研究及其在蛋白分离和纯化中的应用

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