论文摘要
为进一步发掘我国的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt）的菌株资源和新型的cry毒素基因资源,本研究从几种不同生境中采集土样分离出800株野生菌株,从中得出苏云金芽孢杆菌的分布具有一定的规律性：植被覆盖率越高,原始植被保存越完好的地区,Bt出菌率越高；土壤表面腐质层越厚,土壤所含腐殖质越丰富,Bt含量越多。800株野生菌株的伴孢晶体形态大多为圆形,还有方形、菱形,个别菌株同时含有2种或3种晶体,这说明我国菌株资源丰富,并具备多样性的特点。本研究利用PCR-RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP）鉴定体系来鉴定Bt分离株的cry基因类型。根据基因保守区设计通用引物进行PCR扩增,扩增产物进行单酶切或双酶切,依其限制性片断长度多态性（RFLP）图谱分析其基因类型。其结果显示：含cry1类基因型的有107株；含cry2类基因型的有202株；含cry3类基因型的有15株；含cry-8类基因型的有361株；含cry7类的1株；含cry9类的57株；含cry40类的1.株；含cry6类的2株；含cry11类基因的有2株；没鉴定到基因类型的菌株58株,可能含有cry1-35,cry40以外的基因型或新的cry基因型。首次发现3株同时含有cry1类、cry2类、cry8类和cry9类的基因组合,它们的晶体形状都为菱形,都编码130kDa和90kDa的蛋白；这三株菌是否具有广泛的杀虫谱还有待今后进一步探究。菌株FSQ87的cry40基因得到1386bp长度的序列,经克隆、测序及序列比对,与模式基因cry40Ba保持88%的同源相似性；这一基因很可能是新的第三等级的模式基因,有待于该基因全长序列的测定。取含cry8类的Bt菌株,以铜绿丽金龟幼虫为试虫,进行杀虫活性测定,结果显示：校正死亡率为100%的菌株有13株。其中,有12株均含有编码毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋白的cry8Ca基因,这些菌株的伴孢晶体都含有分子量为130kDa的蛋白、晶体形态都为圆形,建议对这部分菌株继续克隆其全长基因,确定是否为第四等级的新基因,以便进一步进行多功能工程菌及转基因抗虫作物的研究和开发。而FTL53没有鉴定到已有的基因类型,有可能是新的cry基因型。取没有检测到cry基因型的Bt菌株,以小菜蛾为试虫,进行杀虫活性测定,结果表明校正死亡率为100%的菌株有3株,分别是：L12、yn5和HF4。这3株菌推测其可能含有cry1-35，cry40以外的基因型或者是新的编码杀灭小菜蛾毒素蛋白的基因。