桦褐孔菌化学成分及药理活性研究

论文摘要

桦褐孔菌的学名为Inonotus obliquus （Pers.:Fr.） Pilát（以下简称IO）,在俄罗斯又被俗称为Chaga。该菌外表黑色,常生于白桦、银桦、榆树和赤杨等活立木的树皮下。IO主要分布于北半球北纬4550°的地区,如俄罗斯西西伯利亚、波兰、芬兰和中国的黑龙江、长白山等地。从十六世纪开始,IO就被俄罗斯、波兰和大多数波罗的海国家用来治疗胃癌、心血管疾病和糖尿病等。虽然IO的用量在逐年增加,但其化学组成和药理作用还有待进一步研究。本研究对IO的化学成分进行了综合分析。先通过分级萃取的方法将IO按石油醚、丙酮、甲醇和水的顺序依次进行萃取。通过气相色谱质谱联用技术对IO石油醚萃取物（IOPE）和丙酮萃取物（IOA）的化学成分进行了分析。其中,IOPE中共检出25个主要组分,占总成分的95.6%,其中含量最高的是甾体化合物,共6个,占总量91.6%。在IOA的气相色谱质谱分析中,鉴定出58个主要组分,占总成分的86.60%。分析结果表明,IOA中含量最高仍是甾体化合物,共14个,占总量77.1%。通过单因素实验及正交实验对IO多糖萃取过程工艺条件进行优化,确定了多糖水萃取的最佳工艺参数。由实验确定的最佳萃取条件为:萃取时间为240 min,萃取温度为90 oC,液料比为14:1,萃取次数为7次。通过用水和稀碱溶液萃取、醇沉、脱蛋白、DEAE柱分离和Sephadex G-100柱纯化等工艺,从IO中分离得到8种多糖。对纯多糖IOPS-2结构进行了分析。凝胶层析法测得IOPS-2的相对分子量为2.76×104。由气相色谱分析、高碘酸氧化-Smith降解、甲基化和部分酸水解等方法分析可知IOPS-2为葡甘露聚糖,主要由端基葡萄糖,1,3-连接的D-吡喃葡萄糖,1,3-连接的D-吡喃甘露糖,1,4,6-连接的D-吡喃甘露糖及1,4,6-连接的D-吡喃葡萄糖构成,其摩尔数比为1.0:2.5:8.3:3.2:0.5。本研究对IOPE、IOA、IOM和IOW的药理活性进行了研究。体内实验证明,IO萃取物具有抑制肿瘤的生长的作用,其抑瘤率随萃取溶剂极性的增大而增大。体外实验结果表明,IOPE和IOA对肿瘤的生长有一定的细胞毒性,能在体外抑制肿瘤的生长,而水萃取物基本不具有细胞毒性。此外,IO各萃取物给药组小鼠血清对K562肿瘤细胞有较大的细胞毒性,且细胞毒作用随着萃取溶剂极性的增大而增大。实验研究了IO各萃取物免疫作用,结果表明,IO各萃取物具有提高荷瘤小鼠脾指数和胸腺指数的作用,并且有助于促进淋巴细胞的增殖和增强NK、LAK细胞的活性。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 概述
• 1.2 IO 成分研究的主要进展
• 1.3 IO 的药理学研究进展
• 1.3.1 抗肿瘤作用
• 1.3.2 抗病毒作用
• 1.3.3 降血糖作用
• 1.3.4 抗氧化作用
• 1.4 甾体化合物的药理活性研究进展
• 1.4.1 甾体类化合物的抗真菌、抗病毒作用
• 1.4.2 甾体类化合物的抗肿瘤作用
• 1.4.3 甾体类化合物的其它作用
• 1.5 多糖结构的分析方法
• 1.5.1 多糖的结构
• 1.5.2 多糖一级结构的分析方法
• 1.5.3 多糖的高级结构分析
• 2 实验部分
• 2.1 样品和试剂
• 2.2 实验动物和细胞
• 2.3 仪器设备
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 分离分析的技术途径
• 2.4.2 IOPE 和 IOA 的组成分析
• 2.4.3 IOPS 的分离纯化及组成分析
• 2.4.4 IO 药理作用研究
• 3 IOPE 和 IOA 的组成分析
• 3.1 IOPE 和 IOA 的 GC-MS 分析（GC-MS Analysis of IOPE and IOA）
• 3.1.1 IOPE 成分 GC-MS 分析（GC-MS Analysis of IOPE）
• 3.1.2 IOA 成分 GC-MS 分析（GC-MS Analysis of IOA）
• 3.1.3 IOM 成分 GC-MS 分析和 HPLC 分析（GC-MS and HPLC Analysis of IOM）
• 3.2 IO 化学成分的分离纯化
• 3.3 小结
• 4 IO 多糖的分离纯化及组成分析
• 4.1 IO 多糖的萃取研究
• 4.1.1 IO 多糖产率的单因子实验
• 4.1.2 IO 多糖得率的正交实验
• 4.2 IO多糖的分离纯化
• 4.2.1 IOPS 的分离纯化
• 4.2.2 IAPS 的分离纯化
• 4.2.3 IOPS 的纯度及分子量测定
• 4.3 多糖的结构分析
• 4.3.1 IOPS-2 的结构分析
• 4.3.2 IOPS-1、IOPS-4 和 IAPS-1 的红外光谱和紫外光谱分析
• 4.4 讨论
• 5 IO 的药理作用研究
• 5.1 IO 的抗肿瘤作用研究
• 5.1.1 IO 对小鼠 S-180 肉瘤的抑制作用
• 5.1.2 IO 的细胞毒作用
• 5.1.3 含药血清对肿瘤细胞的细胞毒作用
• 5.1.4 讨论
• 5.2 IO 的免疫作用
• 5.2.1 IO 对荷瘤小鼠免疫器官的影响
• 5.2.2 IO 对脾淋巴细胞转化的影响
• 5.2.3 IO 对 NK 细胞活性的影响
• 5.2.4 IO 对 LAK 细胞活性的影响
• 5.2.5 讨论
• 5.3 小结
• 6 结论和创新点
• 6.1 结论
• 6.2 创新点
• 参考文献
• 英文缩略语表
• 作者简历