新疆块根芍药（Paeonia anomala）内生菌的分离、XJU-PA-6菌株的鉴定及其红色素的研究

论文摘要

本研究采用碾碎法首次对块根芍药的内生菌进行分离,获得11株内生细菌。通过琼脂扩散法进行拮抗试验,结果表明,其中XJU-PA-6对植物致病菌有很强的拮抗能力。依据形态特征、生理生化检测、16SrDNA、G+Cmo1%,将XJU-PA-6鉴定为粘质沙雷氏菌。对XJU-PA-6产红色素的条件进行研究,得到了其最佳的发酵培养基培方:麦芽糖40g/L,蛋白胨20g/L,精氨酸1g/L,pH6.5-7.0。最佳培养条件: 28℃,180r/min振荡培养,种子液接种量为5%,装样量为150ml（500ml三角瓶中）,培养时间为2d。提取并纯化XJU-PA-6产生的红色素,根据生理生化特征和核磁共振图谱,使其鉴定为灵菌红素。观察动物口服灵菌红素的急性毒性和长期毒性反应。急性毒性实验中,以400 g/kg剂量给实验组腹腔注射灵菌红素。长期毒性实验中,按140g/kg剂量灌胃8周。实验结束后,处死动物,肉眼观察及镜下组织形态学观察均无明显差异或异常。这表明灵菌红素在食品和临床范围内应用是比较安全的。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 一、芍药科植物的研究概况
• 1.1.1 化学成分
• 1.1.2 药理与临床
• 1.1.3 芍药科植物临床作用
• 二、植物内生菌的生物学功能
• 1.2.1 内生菌的概念
• 1.2.2 植物内生菌产生物活性物质的可能机理
• 1.2.3 植物内生细菌的生物学作用
• 1.2.4 促进宿主植物的生长发育
• 1.2.5 增强宿主植物的抗逆性
• 1.2.6 植物内生菌的生物防治作用
• 三、灵菌红素的研究进展
• 1.3.1 灵菌红素的概念
• 1.3.2 灵菌红素的生物活性
• 1.3.2.1 抗肿瘤作用
• 1.3.2.2 免疫抑制剂活性
• 1.3.2.3 抗菌作用
• 1.3.2.4 抗疟疾活性
• 四、本项目的意义
• 参考文献
• 第二章 内生菌的分离和农作物真菌病害拮抗菌的筛选
• 一、材料
• 2.1.1 供试植物
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 供试病原菌
• 2.1.4 待测样品制备
• 2.1.5 ERIC-PCR 引物序列
• 2.1.6 ERIC-PCR 试剂
• 二、方法
• 2.2.1 植株表面消毒及内生菌的分离、培养
• 2.2.2 菌株的筛选
• 2.2.3 拮抗菌株的筛选
• 2.2.4 ERIC-PCR 反模板的制备
• 2.2.5 ERIC-PCR 反应条件
• 2.2.6 药敏测试
• 三、 结果与分析
• 2.3.1 内生菌的分离结果
• 2.3.2 菌株的初步分类
• 2.3.3 拮抗菌株的筛选
• 2.3.4 ERIC - PCR 指纹图谱分析
• 2.3.5 药敏测试
• 三、 讨论
• 参考文献
• 第三章 产红色素内生菌XJU-PA-6 的鉴定
• 一、 材料与方法
• 3.1.1 菌株
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 试剂
• 3.1.4 形态结构和培养特性观察
• 3.1.5 生理生化试验
• 3.1.6 菌株基因组的提取
• 3.1.7 菌株16SrDNA 序列的PCR 与测序
• 3.1.8 XJU-PA-6 菌株基因组的提取
• 3.1.9 XJU-PA-6 菌株G+Cmol%测定
• 3.1.10 16SrDNA 序列分析
• 3.1.11 菌株的生物学特性
• 二、 结果与分析
• 3.2.1 菌落及菌体形态观察
• 3.2.2 XJU-PA-6 生理生化特征
• 3.2.3 XJU-PA-6 的G+Cmol%测定
• 3.2.4 16SrDNA 序列分析
• 3.2.5 XJU-PA-6 与相关菌株的系统进化树分析
• 三、分析与讨论
• 参考文献
• 第四章 菌株XJU-PA-6 红色素的提取及其结构鉴定
• 一、 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.1.3 色素的理化性质
• 4.1.4 发酵条件对菌株XJU-PA-6 合成色素的影响
• 4.1.5 色素的毒性测试
• 二、结果与分析
• 4.2.1 色素的提取
• 4.2.2 色素的理化性质
• 4.2.2.1 色素的光谱特性
• 4.2.2.2 不同pH 值下色素的颜色
• 4.2.2.3 色素的光稳定性
• 4.2.2.4 色素的热稳定性
• 4.2.2.5 蔗糖对色素的影响
• 4.2.2.6 苯甲酸钠对色素的影响
• 4.2.2.7 还原剂对色素的影响
• 4.2.2.8 氧化剂对色素的影响
• 4.2.3 发酵条件对菌株XJU-PA-6 合成色素的影响
• 4.2.3.1 产色素最佳培养基的选择
• 4.2.3.2 培养基初始pH 值的影响
• 4.2.3.3 温度的影响
• 4.2.3.4 装液量的影响
• 4.2.4 色素的结构鉴定
• 4.2.5 色素毒性测试结果
• 三、 结论与讨论
• 参考文献
• 第五章 结论
• 附录
• 在读期间发表论文清单
• 致谢