Zhangfei蛋白在小鼠发情周期卵巢及子宫中的表达

论文摘要

Zhangfei属于具有碱性亮氨酸拉链bZIP结构的转录因子,它参与调节内质网应激和未折叠蛋白反应,并在胚胎发育、人类疾病过程等方面也发挥着重要作用。至今,国内外对Zhangfei蛋白的研究甚少,在生殖内分泌领域的作用未见报道。本实验在抗Zhangfei单克隆抗体大量制备的基础上,采用超敏感的免疫组织化学方法和蛋白免疫印迹技术对小鼠在发情周期中卵巢和子宫中的Zhangfei蛋白表达进行了研究。主要结果如下:1采用切胶电洗脱的方法对Zhangfei融合蛋白进行纯化,可以获得纯度较高的Zhangfei融合蛋白,浓度达2.002 mg/mL;通过培养杂交瘤细胞和小鼠腹水诱生法对抗Zhangfei单抗进行制备,ELISA方法检测杂交瘤细胞培养上清中单抗的效价为1∶1000,腹水单抗的效价为1∶2×10~5。2 Zhangfei在发情周期各阶段小鼠卵巢的卵母细胞胞浆中均有表达。原始卵泡和初级卵泡的颗粒细胞中未见Zhangfei蛋白阳性染色,次级卵泡阶段的颗粒细胞出现Zhangfei蛋白的阳性染色;成熟卵泡的颗粒细胞中Zhangfei蛋白的阳性染色更加明显。此外,在整个发情周期的黄体中均有Zhangfei蛋白阳性分布,而在凋亡的颗粒细胞和各级卵泡的卵泡膜细胞中无表达。从发情前期,发情期,发情后期到间情期,Zhangfei蛋白的表达逐渐增强,推论其可能与卵巢中的类固醇激素有关,对卵巢的组织学变化和协调卵泡成熟过程有重要的生殖生理调控作用。3发情各阶段小鼠子宫均见Zhangfei蛋白的表达,主要分布于内膜腔上皮和腺上皮细胞中,其他部位无表达。其中,Zhangfei蛋白在间情期表达较强,发情期表达较弱,暗示它的表达可能受到卵巢类固醇激素的调控,参与子宫周期性变化的调节。综上所述,本试验在制备抗Zhangfei单克隆抗体的基础上,利用免疫组化技术和蛋白免疫印迹技术对在发情周期不同阶段小鼠卵巢和子宫中的Zhangfei蛋白表达分布进行研究,为进一步研究Zhangfei蛋白在生殖内分泌领域的作用奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 Zhangfei 的研究进展
• 1.1 内质网应激的研究进展
• 1.1.1 内质网应激的产生
• 1.1.2 内质网应激的信号通路
• 1.1.3 内质网应激与细胞凋亡
• 1.1.4 内质网应激与疾病
• 1.1.5 内质网与生殖内分泌
• 1.2 Zhangfei 的研究进展
• 1.2.1 Zhangfei 和Luman 的发现
• 1.2.2 Luman/CREB3
• 1.2.3 Zhangfei/CREBZF
• 试验研究
• 第二章 Zhangfei 单克隆抗体的制备
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 试验动物及菌株细胞株
• 2.1.4 主要试剂的配制
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 Zhangfei 融合蛋白的纯化
• 2.2.2 Zhangfei 单克隆抗体的制备
• 2.3 结果
• 2.3.1 Zhangfei 融合蛋白的纯化
• 2.3.2 Zhangfei 单克隆抗体的制备
• 2.4 讨论
• 2.4.1 Zhangfei 融合蛋白的纯化
• 2.4.2 Zhangfei 单克隆抗体的制备
• 2.5 小结
• 第三章 Zhangfei 在小鼠发情周期卵巢及子宫中的表达
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 主要仪器
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 试验动物
• 3.1.4 主要试剂的配制
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 小鼠发情周期的确定
• 3.2.2 组织的采集与载玻片的处理
• 3.2.3 石蜡切片的制备
• 3.2.4 免疫组化SP 法操作方法
• 3.2.5 小鼠组织总蛋白的提取
• 3.2.6 Western blot 操作方法
• 3.2.7 统计学方法
• 3.3 结果
• 3.3.1 不同发情阶段小鼠阴道上皮细胞及外阴部特征的观察
• 3.3.2 Zhangfei 在不同发情周期小鼠卵巢和子宫的表达
• 3.3.3 Western blot 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介